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肝癌中RACK1对JNK通路的调控作用及机制探讨

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-13页
缩略词表第13-15页
引言第15-19页
 1 JNK 信号通路第15-16页
 2 RACK1 简介第16-17页
 3 肝癌和JNK 信号转导通路第17-18页
 4 本课题研究内容第18-19页
第一章 肝癌中RACK1 与P-JNK 相关性的检测第19-31页
 第一节 肝癌中RACK1 与P-JNK 相关性的检测第19-23页
  1 材料和方法第19-21页
   ·细胞株第19页
   ·主要试剂第19-20页
   ·主要仪器仪器第20页
   ·常用试剂的配制第20页
   ·方法第20-21页
  2 结果第21-23页
   ·肝癌组织芯片中RACK1 与P-JNK 存在相关性第21-23页
   ·肝癌细胞系中RACK1 与P-JNK 存在相关性第23页
 第二节 RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响第23-31页
  1 材料与方法第24-26页
   ·菌株、细胞株及质粒第24页
   ·主要试剂第24页
   ·主要仪器第24页
   ·转染用质粒的制备第24-25页
   ·细胞转染第25页
   ·稳定细胞株的构建第25-26页
  2 结果第26-29页
   ·293T 细胞中RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响第26-28页
   ·HL7702 细胞系中 RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响第28页
   ·HepG2 细胞中RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响第28-29页
  3 讨论第29-30页
  4 小结第30-31页
第二章 MKK7 与RACK1 之间存在相互作用第31-39页
 1 材料和方法第31-34页
   ·材料第31页
   ·主要实验仪器第31-32页
   ·常规试剂配制第32页
   ·细胞免疫荧光第32页
   ·免疫共沉淀第32-33页
   ·GST pull-down第33页
   ·体外翻译实验第33-34页
 2 结果第34-37页
   ·MKK7 与RACK1 之间存在共定位第34页
   ·外源免疫共沉淀验证MKK7 与RACK1 之间存在相互作用第34-35页
   ·生理条件下验证MKK7 与RACK1 之间存在相互作用第35-36页
   ·GST pull-down 及体外翻译实验验证MKK7 与RACK1 之间存在直接相互作用第36-37页
 3 讨论第37页
 4 小结第37-39页
第三章 寻找RACK1 与MKK7 之间的相互作用位点第39-49页
 1 材料和方法第39-42页
   ·材料第39页
   ·主要仪器第39-40页
   ·主要试剂配制第40页
   ·方法第40-42页
 2 结果第42-46页
   ·构建了MKK7 及RACK1 的截短突变体第42页
   ·免疫共沉淀确定了RACK1 与MKK7 的C 端激酶结构域相互作用第42-43页
   ·免疫共沉淀确定了MKK7 与RACK1 的WD5-7 结构域相互作用第43-44页
   ·免疫共沉淀确定了MKK7 与RACK1 的WD6、WD7 结构域相互作用第44-45页
   ·RACK1、MKK7 空间构象的模拟以及功能靶位的理论预测第45-46页
 3 讨论第46-47页
 4 小结第47-49页
第四章 RACK1 与MKK7 相互作用对肝癌细胞生长的影响第49-57页
 1 材料与方法第49-50页
   ·材料第49页
   ·主要仪器第49页
   ·方法第49-50页
 2 结果第50-55页
   ·RACK1 的269-272、275-280 位氨基酸是RACK1 结合MKK7 的特异性靶位第50-52页
   ·RACK1 及其突变体对肝癌细胞集落形成实验的影响第52-53页
   ·RACK1 及其突变体对裸鼠成瘤实验的影响第53-55页
 3 讨论第55-56页
 4 小结第56-57页
第五章 肝癌中RACK1 调控JNK 通路的机制探讨第57-63页
 1 材料和方法第57-59页
   ·材料第57页
   ·常用试剂的配制第57-58页
   ·方法第58-59页
 2 结果第59-61页
   ·RACK1 不能增强MKK7 与JNK 之间的结合第59-60页
   ·RACK1 增强MKK7 磷酸化的机制第60页
   ·肝癌组织中RACK1 高表达的机制第60-61页
 3 讨论第61-62页
 4 小结第62-63页
全文总结第63-65页
参考文献第65-71页
综述第71-83页
 参考文献第78-83页
致谢第83-85页
个人简历第85-86页

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