摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-13页 |
缩略词表 | 第13-15页 |
引言 | 第15-19页 |
1 JNK 信号通路 | 第15-16页 |
2 RACK1 简介 | 第16-17页 |
3 肝癌和JNK 信号转导通路 | 第17-18页 |
4 本课题研究内容 | 第18-19页 |
第一章 肝癌中RACK1 与P-JNK 相关性的检测 | 第19-31页 |
第一节 肝癌中RACK1 与P-JNK 相关性的检测 | 第19-23页 |
1 材料和方法 | 第19-21页 |
·细胞株 | 第19页 |
·主要试剂 | 第19-20页 |
·主要仪器仪器 | 第20页 |
·常用试剂的配制 | 第20页 |
·方法 | 第20-21页 |
2 结果 | 第21-23页 |
·肝癌组织芯片中RACK1 与P-JNK 存在相关性 | 第21-23页 |
·肝癌细胞系中RACK1 与P-JNK 存在相关性 | 第23页 |
第二节 RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响 | 第23-31页 |
1 材料与方法 | 第24-26页 |
·菌株、细胞株及质粒 | 第24页 |
·主要试剂 | 第24页 |
·主要仪器 | 第24页 |
·转染用质粒的制备 | 第24-25页 |
·细胞转染 | 第25页 |
·稳定细胞株的构建 | 第25-26页 |
2 结果 | 第26-29页 |
·293T 细胞中RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响 | 第26-28页 |
·HL7702 细胞系中 RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响 | 第28页 |
·HepG2 细胞中RACK1 对MKK7-JNK-c-Jun 通路的影响 | 第28-29页 |
3 讨论 | 第29-30页 |
4 小结 | 第30-31页 |
第二章 MKK7 与RACK1 之间存在相互作用 | 第31-39页 |
1 材料和方法 | 第31-34页 |
·材料 | 第31页 |
·主要实验仪器 | 第31-32页 |
·常规试剂配制 | 第32页 |
·细胞免疫荧光 | 第32页 |
·免疫共沉淀 | 第32-33页 |
·GST pull-down | 第33页 |
·体外翻译实验 | 第33-34页 |
2 结果 | 第34-37页 |
·MKK7 与RACK1 之间存在共定位 | 第34页 |
·外源免疫共沉淀验证MKK7 与RACK1 之间存在相互作用 | 第34-35页 |
·生理条件下验证MKK7 与RACK1 之间存在相互作用 | 第35-36页 |
·GST pull-down 及体外翻译实验验证MKK7 与RACK1 之间存在直接相互作用 | 第36-37页 |
3 讨论 | 第37页 |
4 小结 | 第37-39页 |
第三章 寻找RACK1 与MKK7 之间的相互作用位点 | 第39-49页 |
1 材料和方法 | 第39-42页 |
·材料 | 第39页 |
·主要仪器 | 第39-40页 |
·主要试剂配制 | 第40页 |
·方法 | 第40-42页 |
2 结果 | 第42-46页 |
·构建了MKK7 及RACK1 的截短突变体 | 第42页 |
·免疫共沉淀确定了RACK1 与MKK7 的C 端激酶结构域相互作用 | 第42-43页 |
·免疫共沉淀确定了MKK7 与RACK1 的WD5-7 结构域相互作用 | 第43-44页 |
·免疫共沉淀确定了MKK7 与RACK1 的WD6、WD7 结构域相互作用 | 第44-45页 |
·RACK1、MKK7 空间构象的模拟以及功能靶位的理论预测 | 第45-46页 |
3 讨论 | 第46-47页 |
4 小结 | 第47-49页 |
第四章 RACK1 与MKK7 相互作用对肝癌细胞生长的影响 | 第49-57页 |
1 材料与方法 | 第49-50页 |
·材料 | 第49页 |
·主要仪器 | 第49页 |
·方法 | 第49-50页 |
2 结果 | 第50-55页 |
·RACK1 的269-272、275-280 位氨基酸是RACK1 结合MKK7 的特异性靶位 | 第50-52页 |
·RACK1 及其突变体对肝癌细胞集落形成实验的影响 | 第52-53页 |
·RACK1 及其突变体对裸鼠成瘤实验的影响 | 第53-55页 |
3 讨论 | 第55-56页 |
4 小结 | 第56-57页 |
第五章 肝癌中RACK1 调控JNK 通路的机制探讨 | 第57-63页 |
1 材料和方法 | 第57-59页 |
·材料 | 第57页 |
·常用试剂的配制 | 第57-58页 |
·方法 | 第58-59页 |
2 结果 | 第59-61页 |
·RACK1 不能增强MKK7 与JNK 之间的结合 | 第59-60页 |
·RACK1 增强MKK7 磷酸化的机制 | 第60页 |
·肝癌组织中RACK1 高表达的机制 | 第60-61页 |
3 讨论 | 第61-62页 |
4 小结 | 第62-63页 |
全文总结 | 第63-65页 |
参考文献 | 第65-71页 |
综述 | 第71-83页 |
参考文献 | 第78-83页 |
致谢 | 第83-85页 |
个人简历 | 第85-86页 |