| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 1. 前言 | 第9-14页 |
| ·蛋白质科学的重要性 | 第9页 |
| ·结构生物学简介 | 第9-11页 |
| ·结构生物学的定义 | 第10页 |
| ·结构生物学的简史 | 第10-11页 |
| ·蛋白质的晶体生长 | 第11-12页 |
| ·结晶原理简介 | 第11页 |
| ·结晶方法简介 | 第11-12页 |
| ·研究目的及意义 | 第12-14页 |
| 2. Sf2523蛋白的克隆、表达、纯化及初步晶体生长 | 第14-35页 |
| ·Sf2523蛋白的存在菌体-志贺菌简介 | 第14-16页 |
| ·Sf2523蛋白所属家族-硫氧还蛋白家族(Thioredoxin Family)简介 | 第16-18页 |
| ·氧化还原反应与自由基 | 第16页 |
| ·硫氧还蛋白家族的构成 | 第16-17页 |
| ·硫氧还蛋白家族的共有结构 | 第17-18页 |
| ·Sf2523蛋白的反应机理 | 第18-20页 |
| ·主要材料 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·实验方法与步骤 | 第20-28页 |
| ·Sf2523蛋白的生物信息学初步分析 | 第20-21页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第21-25页 |
| ·PCR体系 | 第21页 |
| ·PCR产物的回收 | 第21-22页 |
| ·载体质粒的提取 | 第22页 |
| ·双酶切反应 | 第22-23页 |
| ·连接实验 | 第23页 |
| ·Inoue法制备超级感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·转化DH5α感受态细胞 | 第24-25页 |
| ·菌落PCR验证阳性克隆 | 第25页 |
| ·基因测序与双酶切检测 | 第25页 |
| ·sf2523pET28b表达载体转化表达菌株(BL21)和蛋白表达小试鉴定 | 第25页 |
| ·Sf2523蛋白的表达纯化 | 第25-26页 |
| ·Sf2523蛋白的可溶性表达与SDS-PAGE鉴定 | 第25页 |
| ·Sf2523蛋白的大最表达与纯化 | 第25-26页 |
| ·Sf2523蛋白过氧化物酶活性检测 | 第26-27页 |
| ·Sf2523蛋白聚集状态分析与SDS-PAGE、NATIVE-PAGE检测 | 第27页 |
| ·Sf2523蛋白结晶条件筛选实验 | 第27页 |
| ·切除His标签优化晶体生长 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-34页 |
| ·Sf2523蛋白的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第29页 |
| ·Sf2523蛋白可溶性检测与亲和层析 | 第29-30页 |
| ·Sf2523蛋白分子筛层析 | 第30-31页 |
| ·Sf2523过氧化酶活性实验 | 第31-32页 |
| ·Sf2523蛋白聚集状态分析与SDS-PAGE和NATIVE-PAGE检测 | 第32-33页 |
| ·Sf2523蛋白晶体筛选结果 | 第33页 |
| ·Sf2523蛋白晶体优化 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 3. PeCBL1蛋白的克隆、表达、纯化及初步晶体生长研究 | 第35-55页 |
| ·CBL蛋白研究进展 | 第35-41页 |
| ·CBL蛋白家族 | 第35-37页 |
| ·CIPK蛋白激酶 | 第37页 |
| ·CBL蛋白的结构特征与钙离子结合能力 | 第37-39页 |
| ·CBL蛋白及其激酶CIPK蛋白的细胞定位 | 第39-40页 |
| ·CBL-CIPK复合体的功能 | 第40-41页 |
| ·主要材料 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41-42页 |
| ·试验方法与步骤 | 第42-49页 |
| ·PeCBL1蛋白的生物信息学初步分析 | 第42页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第42-47页 |
| ·PCR体系 | 第42-43页 |
| ·PCR产物的回收 | 第43页 |
| ·载体质粒的提取 | 第43-44页 |
| ·双酶切反应 | 第44页 |
| ·连接实验 | 第44-45页 |
| ·Inoue法制备超级感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·转化DH5α感受态细胞 | 第46页 |
| ·菌落PCR验证阳性克隆 | 第46页 |
| ·基因测序与双酶切检测 | 第46页 |
| ·表达载体PeCBL1pET22b转化表达菌株(BL21)和蛋白表达小试鉴定 | 第46-47页 |
| ·PeCBL1蛋白的表达纯化 | 第47-48页 |
| ·PeCBL1蛋白的可溶性表达与SDS-PAGE鉴定 | 第47页 |
| ·PeCBL1蛋白的表达条件的简单优化 | 第47页 |
| ·PeCBL1蛋白的大量表达与纯化 | 第47-48页 |
| ·钙离子对于蛋白聚集状态的影响分析 | 第48页 |
| ·PeCBL1蛋白结晶条件筛选实验 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-54页 |
| ·PeCBL1蛋白的生物信息学预测参数 | 第49-50页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第50页 |
| ·PeCBL1蛋白可溶性检测和亲和层析 | 第50-51页 |
| ·PeCBL1蛋白的分子排阻层析 | 第51-52页 |
| ·Ca~(2+)对于PeCBL1蛋白聚集状态的影响分析 | 第52-53页 |
| ·PeCBL1蛋白的离子交换层析 | 第53页 |
| ·PeCBL1蛋白晶体筛选结果 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 4. 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 个人简介 | 第62-63页 |
| 导师简介 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
