| 目录 | 第1-5页 |
| 缩略语表 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-15页 |
| 实验材料 | 第15-21页 |
| 一、细胞系 | 第15页 |
| 二、菌株 | 第15页 |
| 三、质粒 | 第15-16页 |
| 四、实验动物 | 第16页 |
| 五、培养基及主要试剂 | 第16-17页 |
| 六、VAP33序列及RT-PCR引物 | 第17页 |
| 七、主要储备液及工作液的配制 | 第17-19页 |
| 八、主要耗材 | 第19页 |
| 九、主要仪器 | 第19-21页 |
| 实验方法 | 第21-35页 |
| 一、质粒转化、扩增 | 第21页 |
| 二、质粒DNA的小量制备 | 第21-22页 |
| 三、VAP33基因的克隆 | 第22-25页 |
| 四、重组质粒的构建与鉴定 | 第25-26页 |
| 五、质粒的大量制备 | 第26-27页 |
| 六、细胞培养 | 第27-28页 |
| 七、慢病毒包装 | 第28页 |
| 八、慢病毒滴度测定 | 第28-29页 |
| 九、病毒感染目的细胞及稳定克隆筛选 | 第29页 |
| 十、细胞总蛋白的提取 | 第29页 |
| 十一、BCA法检测蛋白浓度 | 第29-30页 |
| 十二、Western Blotting | 第30-32页 |
| 十三、细胞分析计数仪(CasyTT型)检测细胞大小的分布状况 | 第32页 |
| 十四、MTT法检测细胞增殖 | 第32页 |
| 十五、细胞集落形成能力测定 | 第32页 |
| 十六、肿瘤细胞体外迁移能力测定——细胞划痕法 | 第32-33页 |
| 十七、体外侵袭实验——Transwell | 第33页 |
| 十八、体内移植成瘤及转移实验 | 第33-34页 |
| 十九、制作组织病理学切片 | 第34页 |
| 二十、石蜡切片伊红—苏木素染色 | 第34-35页 |
| 实验结果 | 第35-49页 |
| 一、VAP33基因的扩增 | 第35页 |
| 二、重组载体的构建 | 第35-36页 |
| 三、重组质粒pWPXL-VAP33的鉴定 | 第36-38页 |
| 四、VAP33在不同转移潜能肿瘤细胞中的表达 | 第38-39页 |
| 五、重组慢病毒包装和滴度测定 | 第39页 |
| 六、稳定过表达VAP33细胞株DG6-VAP33和LA1-VAP33的建立与鉴定 | 第39-41页 |
| 七、VAP33过表达对小鼠树突状细胞肉瘤细胞大小分布和形态的影响 | 第41-42页 |
| 八、VAP33过表达对小鼠肿瘤细胞体外增殖能力的影响 | 第42-43页 |
| 九、VAP33过表达对小鼠肿瘤细胞集落形成能力的影响 | 第43-44页 |
| 十、VAP33过表达对小鼠树突状细胞肉瘤细胞体外迁移能力的影响 | 第44-45页 |
| 十一、VAP33过表达对小鼠肿瘤细胞体外侵袭能力的影响 | 第45-46页 |
| 十二、VAP33过表达对小鼠树突状细胞肉瘤细胞体内生长能力的影响 | 第46-48页 |
| 十三、VAP33过表达对小鼠树突状细胞肉瘤细胞转移能力的影响 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录一 文献综述 | 第57-63页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 附录二 哺乳动物及APLYSIA中VAP33氨基酸序列 | 第63-64页 |
| 附录三 重组子PWPXL-VAP33测序结果 | 第64-65页 |
| 附录四 膜融合及GLUT-4运输过程图解 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历 | 第67-68页 |
