| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 略縮词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 新城疫研究现状 | 第14-18页 |
| ·基因组 | 第14页 |
| ·病毒蛋白研究现状 | 第14-17页 |
| ·核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein,NP) | 第14-15页 |
| ·磷蛋白(Phosphoprotein,P) | 第15页 |
| ·基质蛋白(Matrixprotein,M) | 第15-16页 |
| ·融合蛋白(Fusionprotein,F) | 第16页 |
| ·血凝素-神经氨酸酶蛋白(Haemagglutinin-neuraminidase,HN) | 第16-17页 |
| ·大聚合酶蛋白(Large-protein,L) | 第17页 |
| ·新城疫病毒培养特性 | 第17-18页 |
| ·新城疫病毒耐热特性研究 | 第18页 |
| 2 新城疫病毒反向遗传技术研究进展 | 第18-20页 |
| ·反向遗传技术应用于病毒蛋白功能的研究 | 第19页 |
| ·新城疫病毒反向遗传技术在肿瘤治疗中的应用 | 第19页 |
| ·反向遗传技术制备基因工程疫苗 | 第19-20页 |
| 3 荧光定量技术研究进展 | 第20-23页 |
| ·染料法荧光定量技术 | 第21页 |
| ·探针法荧光定量技术 | 第21-23页 |
| ·TaqMan探针法 | 第21-22页 |
| ·分子信标技术 | 第22页 |
| ·杂交探针法 | 第22-23页 |
| ·复合探针法 | 第23页 |
| 4 目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 新城疫病毒耐热株的细胞适应培养 | 第24-34页 |
| 1 材料和方法 | 第24-28页 |
| ·病毒 | 第24页 |
| ·细胞及试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·红细胞的制备 | 第25页 |
| ·BHK细胞培养 | 第25页 |
| ·TPCK-胰酶浓度的优化 | 第25页 |
| ·NDV TS09株在BHK细胞上的传代 | 第25-26页 |
| ·NDV毒株的生物学特性测定 | 第26-27页 |
| ·血凝活性效价(HA)测定 | 第26页 |
| ·鸡胚平均致死时间(MDT)测定 | 第26页 |
| ·脑内致病指数(ICPI) | 第26页 |
| ·半数细胞感染剂量(TCID50)和半数鸡胚感染剂量(EID50) | 第26-27页 |
| ·NDV毒株F、HN基因的扩增与测序 | 第27页 |
| ·NDV毒株F、HN基因的序列分析 | 第27-28页 |
| 2 实验结果 | 第28-31页 |
| ·胰蛋白酶最适浓度的优化 | 第28页 |
| ·TS09株在BHK细胞中的传代培养 | 第28-30页 |
| ·TS09-C株F、HN基因的序列测定与分析 | 第30页 |
| ·NDV毒株F基因的同源性分析 | 第30页 |
| ·NDV毒株的遗传进化分析 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 NDV TS09-C株全基因组序列的测定与分析 | 第34-42页 |
| 1 材料方法 | 第34-35页 |
| ·病毒 | 第34页 |
| ·酶和试剂 | 第34页 |
| ·引物设计和合成 | 第34-35页 |
| ·基因组全长的分段扩增和测序 | 第35页 |
| ·NDV TS09-C株全基因组序列的分析 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-40页 |
| ·PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| ·序列分析 | 第36-39页 |
| ·全基因组基因结构特点分析 | 第36-37页 |
| ·同源性分析 | 第37页 |
| ·系统进化分析 | 第37页 |
| ·HN蛋白糖基化位点分析 | 第37-39页 |
| ·耐热分析 | 第39-40页 |
| ·氨基酸差异性分析 | 第39页 |
| ·二级结构分析 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·序列分析 | 第40-41页 |
| ·耐热分析 | 第41-42页 |
| 第四章 NDV TS09-C株全长cDNA克隆的构建 | 第42-55页 |
| 1 材料和方法 | 第42-50页 |
| ·酶和试剂 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·NDV TS09-C株全长cDNA克隆构建策略 | 第43-47页 |
| ·pBR-ABC质粒的构建方案 | 第44-45页 |
| ·pBR-DE和pBR-FG质粒的构建方案 | 第45-46页 |
| ·全长质粒pBR-TS09-C的构建方案 | 第46-47页 |
| ·病毒RNA的提取、反转录及PCR | 第47页 |
| ·引物自延伸反应 | 第47页 |
| ·融合PCR | 第47页 |
| ·酶切反应 | 第47-48页 |
| ·连接反应 | 第48-49页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·转化实验 | 第49页 |
| ·测序分析 | 第49-50页 |
| ·质粒稳定性测定 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-53页 |
| ·目的片段的扩增 | 第50页 |
| ·构建各质粒的酶切鉴定 | 第50-52页 |
| ·测序分析 | 第52页 |
| ·质粒稳定性试验 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| ·全长cDNA克隆的构建思路 | 第53页 |
| ·PCR扩增以及产物的连接 | 第53页 |
| ·质粒的酶切鉴定及测序 | 第53-55页 |
| 第五章 新城疫荧光定量检测的建立 | 第55-63页 |
| 1 材料方法 | 第55-57页 |
| ·病毒和样品 | 第55页 |
| ·试剂和主要仪器 | 第55页 |
| ·引物及探针的设计合成 | 第55-56页 |
| ·病毒、细菌核酸提取 | 第56页 |
| ·荧光RT-PCR方法的建立 | 第56页 |
| ·标准品的制备 | 第56页 |
| ·灵敏性试验及标准曲线的绘制 | 第56页 |
| ·临床应用 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-61页 |
| ·荧光反应条件的优化 | 第57-59页 |
| ·灵敏性实验 | 第59页 |
| ·特异性实验 | 第59-60页 |
| ·重复性实验 | 第60-61页 |
| ·临床样品检测结果 | 第61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 硕士期间发表文情况 | 第75页 |
