| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| ·精氨酸激酶简介 | 第11-12页 |
| ·精氨酸激酶进化研究概况 | 第12-14页 |
| ·精氨酸激酶的结构研究概况 | 第14-15页 |
| ·点突变对精氨酸激酶催化机制的研究 | 第15-17页 |
| ·几种研究蛋白质构象的方法简介 | 第17-19页 |
| ·本论文研究工作 | 第19-20页 |
| 第二章 精氨酸激酶突变体的构建与表达纯化 | 第20-41页 |
| ·引言 | 第20-21页 |
| ·实验材料和主要仪器 | 第21页 |
| ·试剂与材料 | 第21页 |
| ·主要实验仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·质粒的提取 | 第21-22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·反向PCR 扩增、模板消化和产物环化连接 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·突变重组子的转化 | 第25页 |
| ·测序及突变体表达菌株的构建 | 第25-26页 |
| ·精氨酸激酶及其突变体的表达与纯化 | 第26页 |
| ·实验结果 | 第26-40页 |
| ·反向PCR 产物琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·突变体的测序结果 | 第27-38页 |
| ·突变体重组质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·精氨酸激酶及其突变体的表达与纯化 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 D62 与R193 间的相互作用对精氨酸激酶活性和结构稳定性的影响 | 第41-51页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·实验材料和主要仪器 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·蛋白质浓度和活力测定 | 第42-43页 |
| ·突变体的结构表征 | 第43页 |
| ·突变体的稳定性研究 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-48页 |
| ·酶活性检测 | 第44-45页 |
| ·突变对精氨酸激酶构象的影响 | 第45-46页 |
| ·突变体AK 稳定性研究 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| 第四章 Cys271 在精氨酸激酶构象变化中的作用 | 第51-59页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·实验材料与主要仪器 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-54页 |
| ·蛋白质浓度和活性的测定 | 第52-53页 |
| ·突变体的结构表征 | 第53页 |
| ·突变对酶与底物结合的影响 | 第53-54页 |
| ·实验结果 | 第54-57页 |
| ·突变体的光谱学性质 | 第54-55页 |
| ·突变对酶与底物结合的影响 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录1 硕士学位期间发表的论文 | 第68页 |