| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第1章 绪论 人源蛋白Vav2和Arap3的研究进展 | 第9-33页 |
| ·引言 | 第9-11页 |
| ·Rho家族和Arf家族的小GTP酶 | 第11-15页 |
| ·Rho家族小GTP酶 | 第11-12页 |
| ·ARF家族小GTP酶 | 第12-15页 |
| ·Rac与RhoA以及Rac与Arf6之间的关系 | 第15-19页 |
| ·Rac与RhoA相互拮抗的关系 | 第15-18页 |
| ·Arf6与Rac之间的关系 | 第18-19页 |
| ·Vav2蛋白的研究进展 | 第19-23页 |
| ·Vav2的结构域组成以及其GEF酶活的调控 | 第19-20页 |
| ·Vav2蛋白的功能 | 第20-22页 |
| ·Vav2 SH2结构域的重要性 | 第22-23页 |
| ·Arap3蛋白的研究进展 | 第23-27页 |
| ·ARAP蛋白家族 | 第23-24页 |
| ·Arap3的GAP底物专一性以及其GAP活性的调控 | 第24页 |
| ·Arap3的功能 | 第24-26页 |
| ·已发现的与Arap3相互作用的partners | 第26-27页 |
| ·总结 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-33页 |
| 第2章 人源Vav2 SH2结构域的结构功能研究 | 第33-73页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·SH2结构域的研究背景 | 第33-37页 |
| ·SH2结构域的主要特征 | 第34-35页 |
| ·SH2结构域的类型 | 第35-36页 |
| ·一些特殊的SH2结构域 | 第36-37页 |
| ·实验材料与方法 | 第37-54页 |
| ·实验中所用到的原始质粒以及抗体来源 | 第37-38页 |
| ·引物设计与合成 | 第38页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)体系 | 第38页 |
| ·胶回收PCR产物以及双酶切制造粘性末端 | 第38-39页 |
| ·连接与转化 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌重组质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·重组蛋白表达 | 第40-41页 |
| ·His-tag-Vav2 SH2镍柱亲和纯化 | 第41-42页 |
| ·分子筛纯化 | 第42页 |
| ·GST-tag亲和纯化 | 第42页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第42-43页 |
| ·突变质粒的构建 | 第43页 |
| ·哺乳动物细胞的培养与传代 | 第43-44页 |
| ·哺乳动物细胞的保存与复苏 | 第44页 |
| ·哺乳动物细胞表达质粒的构建 | 第44页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第44-45页 |
| ·实验中所用到的细胞处理方法 | 第45-46页 |
| ·Western blot | 第46-47页 |
| ·GST Pull-down实验 | 第47-48页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第48页 |
| ·等温量热滴定实验(ITC) | 第48-49页 |
| ·NMR滴定化学位移扰动实验 | 第49-50页 |
| ·解析蛋白质三维溶液结构的核磁实验以及原始数据的处理 | 第50-51页 |
| ·主链和侧链化学位移的认证 | 第51-52页 |
| ·NMR结构计算 | 第52-54页 |
| ·实验结果与讨论 | 第54-70页 |
| ·Arap3是Vav2新的相互作用蛋白 | 第54-55页 |
| ·Vav2与Arap3的相互作用受到Arap3磷酸化水平的调节 | 第55-56页 |
| ·Vav2的SH2结构域介导Vav2与磷酸化的Arap3直接相互作用 | 第56-57页 |
| ·Vav2 SH2结构域克隆,表达与纯化 | 第57-58页 |
| ·Vav2-SH2结构域直接结合Arap3 C末端两个酪氨酸磷酸化位点 | 第58-59页 |
| ·Vav2 SH2结构域的对小肽pY+3位残基的选择性 | 第59-60页 |
| ·Vav2-SH2结构域与小肽Arap3-pY1408复合物溶液结构解析 | 第60-62页 |
| ·Vav2 SH2结构域与小肽Arap3-pY1408复合物结构描述 | 第62-63页 |
| ·小肽pY1408与Vav2 SH2结构域的特异性相互作用 | 第63-65页 |
| ·Vav2SH2/Arap3-pY1408复合物与其它SH2/小肽复合物结构比较 | 第65-68页 |
| ·Vav2与Arap3相互作用可能的生物学意义 | 第68-69页 |
| ·APP和Nectin-3是Vav2可能的相互作用蛋白 | 第69-70页 |
| ·总结与展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 第3章 人源Arap3蛋白ArfGAP结构域的结构研究 | 第73-95页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·ArfGAP结构域的研究进展 | 第73-80页 |
| ·小GTP酶的GAP简介 | 第73-75页 |
| ·ARF家族GTPases的GAP蛋白 | 第75-76页 |
| ·ArfGAP结构域 | 第76-80页 |
| ·实验材料与方法 | 第80-83页 |
| ·克隆边界的选择 | 第80页 |
| ·克隆与表达 | 第80-81页 |
| ·Arap3重组蛋白的纯化 | 第81页 |
| ·TEV蛋白酶切除His-tag | 第81页 |
| ·胰蛋白酶限制性酶解以及质谱实验 | 第81-82页 |
| ·圆二色谱(CD谱)实验 | 第82页 |
| ·核磁实验 | 第82-83页 |
| ·主链弛豫实验 | 第83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-91页 |
| ·Arap3蛋白PAH区域的克隆,表达,纯化及结构表征 | 第83-85页 |
| ·Arap3-PAH区域的限制性酶解以及质谱鉴定 | 第85-86页 |
| ·Arap3 AH区域的结构研究 | 第86-87页 |
| ·Arap3 AH区域溶液结构解析 | 第87-89页 |
| ·Arap3 AH区域的主链动力学 | 第89-91页 |
| ·总结与展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第96页 |
