| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一章 A-to-I RNA编辑对抑癌基因ARHGAP26的调控研究 | 第18-39页 |
| 1 实验主要材料 | 第18-22页 |
| ·细胞和组织来源 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·PCR引物及siRNA序列 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-30页 |
| ·细胞培养 | 第22-23页 |
| ·细胞或组织DNA提取步骤 | 第23-24页 |
| ·RNA的提取步骤 | 第24页 |
| ·RNA质量鉴定 | 第24-25页 |
| ·除去RNA中的基因组DNA | 第25页 |
| ·反转录步骤 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增含编辑位点的片段 | 第26页 |
| ·RNA编辑的检测 | 第26页 |
| ·实时定量PCR | 第26-27页 |
| ·siRNA转染步骤 | 第27-28页 |
| ·Western免疫印迹分析 | 第28-30页 |
| 3 结果 | 第30-38页 |
| ·多种组织来源的细胞系中普遍存在ARHGAP26 3’UTR的A-to-I RNA编辑现象 | 第30-32页 |
| ·肿瘤中ARHGAP26 3’UTR编辑水平降低 | 第32-33页 |
| ·ARHGAP26 3’UTR的A-to-I RNA编辑现象由ADAR1介导 | 第33-35页 |
| ·A-to-I RNA编辑调控ARHGAP26的表达 | 第35-38页 |
| 4 小结与讨论 | 第38-39页 |
| 第二章 A-to-I RNA编辑调控ARHGAP26的机制研究 | 第39-52页 |
| 1 主要试剂及材料 | 第39-41页 |
| ·质粒、菌株及细胞来源 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·培养基和主要试剂配制 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-45页 |
| ·质粒构建引物设计 | 第41页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第41-42页 |
| ·PCR产物的回收 | 第42页 |
| ·质粒及片段的双酶切 | 第42页 |
| ·DNA纯化回收 | 第42-43页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第43页 |
| ·转化 | 第43页 |
| ·克隆的鉴定与保存 | 第43-44页 |
| ·高纯度质粒的提取 | 第44页 |
| ·细胞培养 | 第44页 |
| ·转染 | 第44-45页 |
| ·荧光活性的检测 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-50页 |
| ·ARHGAP26 3’UTR野生型及突变型荧光报告质粒的构建 | 第45-49页 |
| ·野生型荧光报告质粒的构建 | 第46页 |
| ·突变型荧光报告质粒的构建 | 第46-48页 |
| ·荧光报告质粒的鉴定 | 第48-49页 |
| ·细胞转染与荧光活性的检测 | 第49-50页 |
| 4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 A-to-I RNA编辑对癌基因GLI1的调控机制研究 | 第52-61页 |
| 1 实验主要材料 | 第52-54页 |
| ·细胞和组织来源 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·主要试剂的配制 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-55页 |
| ·细胞培养 | 第54页 |
| ·DNA、RNA的提取 | 第54页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第54-55页 |
| ·A-to-I RNA编辑的检测 | 第55页 |
| ·生物信息学工具 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-59页 |
| ·多种组织和细胞系中GLI1编码区R/G位点普遍发生A-to-I RNA编辑 | 第55-57页 |
| ·肝癌及乳腺癌细胞系中GLI1编码区RNA编辑明显下调或消失 | 第57-58页 |
| ·GLI1编码区RNA编辑潜在功能影响的生物信息学分析 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 总结 | 第61-63页 |
| ·本研究取得的主要成果 | 第61页 |
| ·本研究的创新之处 | 第61-62页 |
| ·需要进一步解决的问题 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表论文目录 | 第76页 |
