| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-30页 |
| 第一章 禽类IFN-γ的分子生物学研究进展 | 第14-21页 |
| 1 鸡IFN-γ的结构 | 第14页 |
| 2 火鸡IFN-γ的结构 | 第14-15页 |
| 3 鸭IFN-γ的结构 | 第15页 |
| 4 鸡IFN-γ的研究应用及进展 | 第15-18页 |
| 参考文献 | 第18-21页 |
| 第二章 基因转移载体在体内分布的研究进展 | 第21-30页 |
| 1 引物设计 | 第21页 |
| 2 组织样品的采集 | 第21-22页 |
| 3 动物试验设计 | 第22页 |
| 4 放射性标记载体的分布 | 第22-23页 |
| 5 基因转移载体家族的生物分布 | 第23-26页 |
| ·腺病毒载体 | 第23-24页 |
| ·Ⅱ型腺相关病毒(AAV2)载体的体内分布研究 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA载体 | 第25-26页 |
| ·源于Ⅰ型和Ⅱ型疱疹病毒载体 | 第26页 |
| 6 小结 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-30页 |
| 第二部分 研究内容 | 第30-74页 |
| 第三章 萧山鸡IFN-γ成熟蛋白基因的克隆及原核表达 | 第31-50页 |
| 摘要 | 第31页 |
| 1 材料 | 第31-32页 |
| ·基因工程载体、菌株 | 第31页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·分子生物学试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-43页 |
| ·萧山鸡IFN-γ的克隆 | 第32-37页 |
| ·PCR引物设计 | 第32页 |
| ·鸡脾淋巴细胞的分离及在ConA的诱导下培养 | 第32页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR | 第33页 |
| ·构建于pGEM-T easy载体 | 第33-37页 |
| ·原核表达载体pET30a-ChIFN-γ的构建 | 第37-41页 |
| ·重组载体pET30a-ChIFN-γ构建 | 第37页 |
| ·PCR引物的设计 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增ChIFN-γ | 第38页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·pCI-ChIFN-γ的构建 | 第39-41页 |
| ·ChIFN-γ原核表达及鉴定 | 第41-43页 |
| ·ChIFN-γ的小量表达 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE分析原核产物表达情况 | 第41-43页 |
| 3 结果 | 第43-46页 |
| ·RT-PCR扩增萧山鸡IFN-γ成熟蛋白基因及序列分析 | 第43页 |
| ·RT-PCR结果 | 第43页 |
| ·序列分析 | 第43页 |
| ·载体构建结果 | 第43-44页 |
| ·T载体连接产物的结果 | 第43-44页 |
| ·原核表达载体构建结果 | 第44页 |
| ·测序 | 第44-45页 |
| ·原核表达及表达条件的优化 | 第45-46页 |
| ·原核表达 | 第45页 |
| ·IPTG诱导浓度的选择 | 第45页 |
| ·诱导时间的选择 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 第四章 重组鸡IFN-γ质粒(pCI-ChIFN-γ-EGFP).的构建及表达 | 第50-62页 |
| 摘要 | 第50页 |
| 1 材料 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-58页 |
| ·真核表达载体pCI-ChIFN--γ-EGFP的构建 | 第51-56页 |
| ·pCI-ChIFN-γ-EGFP的构建 | 第51-52页 |
| ·PCR引物设计 | 第52页 |
| ·PCR扩增ChIFN-γ | 第52-53页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第53页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第53-54页 |
| ·pCI-ChIFN-γ的构建 | 第54-55页 |
| ·pCI-ChIFN-γ-EGFP质粒的构建 | 第55-56页 |
| ·pCI-ChIFN-γ-EGFP体外表达 | 第56-58页 |
| ·转染级超纯度真核表达质粒的制备 | 第56-57页 |
| ·pCI-ChIFN-γ-EGFP在CEF细胞中的表达 | 第57页 |
| ·pCI-ChIFN-γ-EGFP在PBLC中的表达 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-59页 |
| ·pCI-ChIFN-γ-EGFP重组体的鉴定 | 第58页 |
| ·pCI-ChIFN-γ-EGFP重组质粒的体外表达 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第五章 重组鸡IFN-γ质粒(pCI-ChIFN-γ)的构建及体内分布研究 | 第62-74页 |
| 摘要 | 第62页 |
| 1 材料 | 第62-63页 |
| ·基因工程载体、菌株和细胞株 | 第62页 |
| ·实验动物 | 第62-63页 |
| ·分子生物学试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| 2 方法 | 第63-69页 |
| ·真核表达载体pCI-ChIFN-γ的构建 | 第63-68页 |
| ·pCI-ChIFN-γ构建 | 第63-64页 |
| ·PCR引物设计 | 第64页 |
| ·PCR扩增ChIFN-γ | 第64-65页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第65页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第65-66页 |
| ·pCI-ChIFN-γ的构建 | 第66-68页 |
| ·pCI-ChIFN-γ体内分布研究 | 第68页 |
| ·真核表达质粒pCI-ChIFN-γ的大量制备 | 第68页 |
| ·动物试验 | 第68页 |
| ·样品采集 | 第68页 |
| ·pCI-ChIFN-γ的体内分布 | 第68-69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 第三部分 总结与展望 | 第74-76页 |
| 第四部分 附录 | 第76-82页 |
| 附录1 常用试剂及缓冲液 | 第77-81页 |
| 附录2 攻读硕士期间参与的课题 | 第81页 |
| 附录3 攻读硕士期间发表的论文 | 第81-82页 |
| 附录4 致谢 | 第82页 |
