| 缩写词 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.龙眼在酸雨胁迫下基因的差异表达 | 第11-18页 |
| ·酸雨概况以及对植物影响的研究进展 | 第11-12页 |
| ·研究基因差异的方法:mRNA差异显示技术 | 第12-14页 |
| ·mRNA差别显示技术的基本原理 | 第13页 |
| ·mRNA差别显示技术的操作步骤 | 第13页 |
| ·mRNA差别显示技术的优缺点 | 第13-14页 |
| ·差异显示技术在植物逆境胁迫研究中的应用 | 第14-17页 |
| ·在抗病性研究上的应用 | 第14-15页 |
| ·在温度胁迫研究上的应用 | 第15-16页 |
| ·在金属抗敏性研究上的应用 | 第16页 |
| ·在盐分胁迫研究上的应用 | 第16-17页 |
| ·在水分胁迫研究中的应用 | 第17页 |
| ·在缺氧胁迫研究中的应用 | 第17页 |
| ·研究的意义 | 第17-18页 |
| 2.龙眼脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因的克隆 | 第18-22页 |
| ·抗坏血酸与环境胁迫 | 第18-19页 |
| ·活性氧及活性氧清除系统 | 第18页 |
| ·抗坏血酸在环境胁迫条件下的作用 | 第18-19页 |
| ·植物脱氢抗坏血酸还原酶的研究进展 | 第19-21页 |
| ·本试验的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 龙眼酸雨胁迫下基因的差异表达 | 第22-41页 |
| 1.试验材料及方法 | 第22-26页 |
| ·试验材料与酸雨配置 | 第22页 |
| ·主要实验仪器、试剂 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·mRNA差异显示所用引物 | 第22页 |
| ·主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| ·龙眼叶片RNA的提取与检测 | 第23-24页 |
| ·CTAB法提取龙眼叶片RNA | 第23页 |
| ·改良热硼酸法提取龙眼叶片RNA | 第23页 |
| ·龙眼叶片RNA的检测 | 第23-24页 |
| ·总RNA含量和纯度的测定 | 第23-24页 |
| ·总RNA的电泳检测 | 第24页 |
| ·mRNA差异显示技术体系的建立 | 第24-25页 |
| ·回收差异条带进行二次扩增 | 第25页 |
| ·连接转化 | 第25页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备-CaCl_2法 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第26页 |
| ·酶切鉴定 | 第26页 |
| ·测序 | 第26页 |
| 2.结果与分析 | 第26-33页 |
| ·RNA质量 | 第26-27页 |
| ·DDRT-PCR参数优化 | 第27-30页 |
| ·总RNA用量 | 第27-28页 |
| ·引物浓度 | 第28页 |
| ·Taq DNA聚合酶浓度 | 第28-29页 |
| ·dNTPs浓度 | 第29页 |
| ·退火温度 | 第29-30页 |
| ·差异显示结果 | 第30页 |
| ·差异片段的回收、重扩增 | 第30-31页 |
| ·差异片段的克隆 | 第31页 |
| ·序列分析 | 第31-33页 |
| 3.讨论 | 第33-41页 |
| ·龙眼叶片RNA提取与逆转录 | 第33-34页 |
| ·mRNA差异显示技术体系的建立 | 第34-36页 |
| ·dNTP浓度 | 第34页 |
| ·Taq酶 | 第34-35页 |
| ·引物浓度 | 第35页 |
| ·退火温度 | 第35页 |
| ·引物组合 | 第35页 |
| ·凝胶的选择 | 第35-36页 |
| ·龙眼叶片差异显示技术体系的优化结论 | 第36页 |
| ·差异结果分析 | 第36-37页 |
| ·差别片段的提纯与再扩增 | 第37页 |
| ·PCR产物克隆 | 第37-38页 |
| ·序列分析 | 第38-41页 |
| 第三章 龙眼DHAR基因的克隆 | 第41-50页 |
| 1.试验材料与方法 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·引物合成 | 第41页 |
| ·仪器与设备 | 第41-42页 |
| ·试验方法 | 第42-43页 |
| ·DHAR基因保守区片段的克隆 | 第42页 |
| ·逆转录 | 第42页 |
| ·PCR扩增 | 第42页 |
| ·DHAR基因的3′-RACE | 第42-43页 |
| ·逆转录 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增 | 第43页 |
| ·PCR产物的胶回收及检测,连接转化与蓝白斑筛选,重组质粒PCR检测 | 第43页 |
| 2.结果与分析 | 第43-48页 |
| ·DHAR基因cDNA中间片段的克隆 | 第43-46页 |
| ·DHAR基因cDNA中间片段的获得 | 第43-44页 |
| ·DHAR基因cDNA中间片段重组质粒的鉴定 | 第44页 |
| ·DHAR基因cDNA中间片段的序列测定 | 第44-46页 |
| ·DHAR基因cDNA3'端片段的克隆 | 第46-48页 |
| ·DHAR基因的3'-RACE扩增结果 | 第46-47页 |
| ·DHAR基因cDNA 3'端片段重组质粒的鉴定 | 第47页 |
| ·DHAR基因cDNA 3'端片段的序列测定 | 第47-48页 |
| ·龙眼DHAR基因序列拼接后结果 | 第48页 |
| 3.讨论 | 第48-50页 |
| ·DHAR基因在植物抗逆方面的作用 | 第48-49页 |
| ·RACE技术的优化 | 第49页 |
| ·龙眼中DHAR基因全长的获得及龙眼DHAR基因功能的讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
