| 摘要 | 第1-7页 |
| Summary | 第7-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-38页 |
| 1 卵母细胞成熟的调控 | 第20-27页 |
| ·卵母细胞成熟分裂阻滞 | 第20-21页 |
| ·卵母细胞成熟抑制因子（Oocyte Meiosis Inhibitor，OMI） | 第20-21页 |
| ·环磷酸腺苷（cAMP） | 第21页 |
| ·卵母细胞减数分裂的恢复 | 第21-27页 |
| ·成熟促进因子（Maturation Promoting Factor，MPF） | 第21-23页 |
| ·有丝分裂原激活的蛋白激酶（Mitogen-activated Protein Kinases, MAPKs） | 第23-24页 |
| ·蛋白激酶C（Protein Kinase C，PKC） | 第24-25页 |
| ·AMP 激活的蛋白激酶（AMPK） | 第25-26页 |
| ·Ca~(2+) | 第26-27页 |
| 2 卵母细胞成熟过程中超微结构变化 | 第27-30页 |
| ·卵母细胞透明带（ZP）的变化 | 第27-28页 |
| ·卵母细胞微绒毛的变化 | 第28页 |
| ·卵母细胞细胞器的变化 | 第28-30页 |
| ·线粒体(mitochondria) | 第28-29页 |
| ·内质网(endoplasmicreticulum,ER) | 第29页 |
| ·高尔基复合体(golgicomplexes) | 第29页 |
| ·皮质颗粒(corticalgranules) | 第29页 |
| ·细胞核的变化 | 第29-30页 |
| 3 VEGF 在哺乳动物生殖调控中的作用及其研究进展 | 第30-35页 |
| ·VEGF 在哺乳动物生殖调控中的作用 | 第30-32页 |
| ·VEGF 的结构、分布、功能和受体 | 第32-34页 |
| ·VEGF 的结构、分布及种类 | 第32-33页 |
| ·VEGF 受体结构与功能 | 第33-34页 |
| ·VEGF 的表达与调控 | 第34-35页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 5 技术路线 | 第37-38页 |
| 第二部分 试验研究 | 第38-114页 |
| 第一章 血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的影响 | 第38-51页 |
| 第一节 不同浓度VEGF 对绵羊胚胎体外发育的影响 | 第38-42页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第38页 |
| ·绵羊卵母细胞的采集 | 第38页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第38-39页 |
| ·绵羊卵母细胞体外成熟的观察 | 第39页 |
| ·绵羊成熟卵母细胞的体外受精 | 第39页 |
| ·绵羊卵母细胞受精后体外培养 | 第39-40页 |
| ·试验设计 | 第40-41页 |
| ·试验1—添加不同浓度VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 | 第40页 |
| ·试验2—添加不同浓度VEGF 对绵羊卵母细胞体外受精卵裂率的影响 | 第40页 |
| ·试验3—添加不同浓度VEGF 对绵羊胚胎发育的影响 | 第40-41页 |
| ·统计分析 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-42页 |
| ·VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 | 第41页 |
| ·VEGF 对绵羊卵母细胞体外受精卵裂率和胚胎发育的影响 | 第41-42页 |
| 第二节 BSA 成熟培养液中添加VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的影响 | 第42-45页 |
| 1 材料与方法 | 第42-44页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第42页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第42页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第42页 |
| ·绵羊卵母细胞体外成熟的观察 | 第42-43页 |
| ·绵羊成熟卵母细胞的体外受精 | 第43页 |
| ·绵羊卵母细胞受精后体外培养 | 第43页 |
| ·试验设计 | 第43页 |
| ·统计分析 | 第43-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-45页 |
| ·BSA 成熟液中VEGF 添加对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 | 第44页 |
| ·BSA 成熟液中添加VEGF 后对绵羊体外受精胚胎卵裂率、桑葚胚率、囊胚率的影响 | 第44-45页 |
| 第三节 VEGF 添加对绵羊卵母细胞体外受精多精入卵的影响 | 第45-47页 |
| 1 材料与方法 | 第45-46页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第45页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第45页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第45页 |
| ·绵羊卵母细胞体外成熟的观察 | 第45页 |
| ·绵羊成熟卵母细胞的体外受精 | 第45页 |
| ·绵羊成熟卵母细胞的体外受精后染色 | 第45-46页 |
| ·试验设计 | 第46页 |
| ·统计分析 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-47页 |
| 第四节 讨论 | 第47-50页 |
| 1 不同浓度VEGF 绵羊胚胎体外发育影响 | 第47-48页 |
| 2 BSA 成熟培养液中添加VEGF 对绵羊胚胎体外发育影响 | 第48-49页 |
| 3 VEGF 添加对绵羊卵母细胞体外受精多精入卵的影响 | 第49-50页 |
| 第五节 结论 | 第50-51页 |
| 第二章 VEGF 促进绵羊卵母细胞体外成熟的机理 | 第51-114页 |
| 第一节 VEGF 添加对绵羊卵母细胞体外成熟过程中细胞 核成熟和细胞质成熟的影响 | 第51-65页 |
| 一、VEGF 添加对绵羊卵母细胞体外成熟过程中细胞核成熟的影响 | 第53-55页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第53页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第53页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第53页 |
| ·绵羊成熟卵母细胞的染色 | 第53页 |
| ·统计分析 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-55页 |
| 二、VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中α-tubulin 蛋白和微管组织中心（MTOCs）时空迁移和重新组装的影响 | 第55-61页 |
| 1 材料与方法 | 第55-56页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第55页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第55页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第55页 |
| ·免疫荧光检测α-Tubulin 蛋白的分布 | 第55-56页 |
| ·统计分析 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-61页 |
| ·VEGF 添加后对绵羊卵母细胞体外成熟过程中α-Tubulin 蛋白的时空迁移与重新组装的影响 | 第56-60页 |
| ·VEGF 添加后对绵羊卵母细胞体外成熟过程中微管组织中心（MTOCs）的时空迁移的影响 | 第60-61页 |
| 三、VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中皮质颗粒的时空迁移的影响 | 第61-65页 |
| 1 材料与方法 | 第61-62页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第61页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第61页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第61页 |
| ·免疫荧光检测皮质颗粒的分布 | 第61-62页 |
| ·统计分析 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-65页 |
| 第二节 VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中细胞超微结构变化的影响 | 第65-71页 |
| 1 材料与方法 | 第65-66页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第65页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第65页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第65页 |
| ·透射电镜样品制备 | 第65-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-71页 |
| 第三节 VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中三种磷酸化蛋白激酶活性变化的影响 | 第71-80页 |
| 一、VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）变化的影响 | 第73-75页 |
| 1 材料与方法 | 第73-74页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第73页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第73页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第73页 |
| ·绵羊卵母细胞体外成熟不同时间卵母细胞的收集与裂解 | 第73页 |
| ·丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）测定 | 第73-74页 |
| ·统计分析 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-75页 |
| 二、VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中蛋白激酶C（PKCs）变化的影响 | 第75-78页 |
| 1 材料与方法 | 第75-76页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第75页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第75-76页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第76页 |
| ·绵羊卵母细胞体外成熟不同时间卵母细胞的收集与裂解 | 第76页 |
| ·蛋白激酶C（PKC）测定 | 第76页 |
| ·统计分析 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-78页 |
| 三、VEGF 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中酪氨酸蛋白激酶（PTKs）变化的影响 | 第78-80页 |
| 1 材料与方法 | 第78-79页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第78页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第78页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第78页 |
| ·绵羊卵母细胞体外成熟不同时间卵母细胞的收集与裂解 | 第78页 |
| ·酪氨酸蛋白激酶（PTKs）测定 | 第78-79页 |
| ·统计分析 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-80页 |
| 第四节 VEGF及其受体KDR/Flk-1和Flt-1在绵羊卵母细胞体外成熟过程中的表达 | 第80-114页 |
| 一、VEGF 及其受体KDR/Flk-1 和Flt-1 部分序列的克隆和鉴定 | 第81-89页 |
| 1 材料和方法 | 第81-85页 |
| ·主要仪器设备 | 第81页 |
| ·细菌和质粒 | 第81页 |
| ·试剂和酶 | 第81-82页 |
| ·RNA 的提取 | 第82页 |
| ·反转录和PCR | 第82-84页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第84页 |
| ·PCR 产物与pGEM-T 载体的连接和测序 | 第84页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第84-85页 |
| 2 结果 | 第85-89页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第85页 |
| ·测序结果 | 第85-89页 |
| 二、RT-PCR 方法检测VEGF 及其受体KDR/Flk-1 和 Flt-1 mRNA 在绵羊卵母细胞体外成熟过程中的表达 | 第89-94页 |
| 1 材料与方法 | 第89-90页 |
| ·材料 | 第89页 |
| ·卵母细胞的收集 | 第89-90页 |
| ·RT-PCR | 第90页 |
| 2 结果 | 第90-94页 |
| ·阳性对照β-actin mRNA 在不同成熟时间卵母细胞和颗粒细胞中的表达 | 第90-92页 |
| ·不同成熟时间卵母细胞和颗粒细胞中VEGF m RNA 的表达 | 第92页 |
| ·Flt-1 mRNA 在不同成熟时间卵母细胞和颗粒细胞中的表达 | 第92-93页 |
| ·KDR/Flk-1 mRNA 在不同成熟时间卵母细胞和颗粒细胞中的表达 | 第93-94页 |
| 三、免疫细胞化学的方法研究VEGF 受体KDR/Flk-1 和 Flt-1 蛋白在卵母细胞成熟过程中的表达 | 第94-114页 |
| 1 材料与方法 | 第94-95页 |
| ·离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 | 第94页 |
| ·绵羊卵巢卵母细胞的采集 | 第94页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟培养 | 第94页 |
| ·免疫荧光检测KDR/Flk-1 和Flt-1 蛋白在卵母细胞成熟过程中的表达 | 第94-95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-114页 |
| ·VEGF 受体Flt-1 在卵母细胞成熟过程中的表达 | 第95-97页 |
| ·VEGF 受体KDR/Flk-1 在卵母细胞成熟过程中的表达 | 第97-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-132页 |
| 个人简介 | 第132-134页 |
| 导师赵有璋教授简介 | 第134-135页 |
