缩略语表 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-12页 |
Abstract | 第12-16页 |
前言 | 第16-18页 |
文献回顾 | 第18-32页 |
第一部分 FHL1C 真核表达载体和慢病毒表达载体构建及验证 | 第32-43页 |
1 实验材料 | 第32-34页 |
·材料、质粒、细胞系和细菌品系 | 第32页 |
·常用分子生物学试剂 | 第32-33页 |
·常用缓冲液试剂 | 第33页 |
·主要仪器 | 第33-34页 |
2 实验方法 | 第34-36页 |
·RNA 提取和RT-PCR | 第34页 |
·分子克隆 | 第34-35页 |
·细胞培养 | 第35页 |
·真核表达载体构建及转染 | 第35页 |
·病毒表达载体构建及转染 | 第35-36页 |
·流式细胞检测 | 第36页 |
·Western blot | 第36页 |
3 实验结果 | 第36-42页 |
·FHL1C 基因克隆,载体成功构建 | 第36-39页 |
·真核表达载体pCMV-myc-FHL1C 的构建及验证 | 第39-40页 |
·慢病毒表达载体pLenti6/V5-FHL1C-IRES-GFP 构建及验证 | 第40-42页 |
4 讨论 | 第42-43页 |
第二部分 过表达FHL1C 对于JURKAT 细胞(急性T 淋巴白血病细胞)的生物学特征的影响 | 第43-56页 |
1 实验材料 | 第43-45页 |
·材料、质粒、细胞系和细菌品系 | 第43页 |
·常用分子生物学试剂 | 第43-44页 |
·主要缓冲液和试剂 | 第44页 |
·主要仪器 | 第44-45页 |
2 实验方法 | 第45-48页 |
·真核表达载体构建 | 第45页 |
·细胞培养 | 第45页 |
·Amaxa 核酸转染 | 第45页 |
·Western Blot | 第45-46页 |
·细胞生长曲线绘制 | 第46页 |
·细胞周期 | 第46-47页 |
·Hoechst 染色 | 第47页 |
·透射电镜 | 第47-48页 |
·AnnexinV/ PI 凋亡检测 | 第48页 |
3 实验结果 | 第48-54页 |
·pEGFP-C1-FHL1C 真核表达载体构建 | 第48-49页 |
·过表达FHL1C 的Jurkat 细胞绝对数明显减少 | 第49-50页 |
·过表达FHL1C 的Jurkat 细胞增殖无异常 | 第50-51页 |
·过表达FHL1C 的Jurkat 细胞凋亡增多 | 第51-54页 |
4. 讨论 | 第54-56页 |
第三部分 FHL1C抑制NOTCH信号诱导T-ALL细胞凋亡的分子机制初步探讨 | 第56-66页 |
1 实验材料 | 第56-58页 |
·材料、质粒、细胞系、细菌品系 | 第56页 |
·常用分子生物学试剂 | 第56-57页 |
·常用缓冲液试剂 | 第57页 |
·主要仪器 | 第57页 |
·实时定量PCR 引物序列 | 第57-58页 |
2 实验方法 | 第58-60页 |
·细胞培养及转染 | 第58页 |
·双荧光素酶报告基因 | 第58-59页 |
·Amaxa 核酸转染 | 第59页 |
·流式细胞分选 | 第59页 |
·RNA 提取和 RT-PCR | 第59页 |
·Real-time PCR | 第59-60页 |
·Western blot | 第60页 |
3 实验结果 | 第60-64页 |
·过表达FHL1C 抑制RBP-J 介导Notch 信号途径的转录 | 第60-61页 |
·过表达FHL1C 的Jurkat 细胞中 Notch 下游基因表达下调 | 第61-62页 |
·过表达FHL1C 的Jurkat 细胞中凋亡分子表达上调,抗凋亡分子表达下调 | 第62-64页 |
4 讨论 | 第64-66页 |
小结 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-76页 |
个人简历和研究成果 | 第76-77页 |
致谢 | 第77页 |