| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章、文献综述 | 第10-24页 |
| ·植酸酶及分子生物学研究进展 | 第10-15页 |
| ·植酸简介 | 第10页 |
| ·植酸酶的酶学性质 | 第10页 |
| ·植酸酶的来源及研究应用 | 第10-11页 |
| ·植酸酶基因 | 第11-12页 |
| ·植酸酶的分子结构 | 第12-14页 |
| ·植酸酶基因工程 | 第14-15页 |
| ·植酸酶研究的发展方向 | 第15页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第15-24页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第16页 |
| ·宿主菌 | 第16页 |
| ·毕赤酵母的遗传学特征 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第17-20页 |
| ·优化外源基因在P. pastoris中的表达 | 第20-24页 |
| 第二章、引言 | 第24-26页 |
| ·研究目的与意义 | 第24页 |
| ·主要内容 | 第24-25页 |
| ·Mut~S重组子的构建 | 第24页 |
| ·不同表型的酵母工程菌对植酸酶表达的影响 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第三章、材料与方法 | 第26-34页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·菌种和质粒载体 | 第26页 |
| ·主要化学试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·主要溶剂及其配制 | 第26-28页 |
| ·引物来源 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-34页 |
| ·大肠杆菌(E. coli)DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第28页 |
| ·质粒DNA样品的制备 | 第28-29页 |
| ·毕赤酵母(GS115)原生质体的制备 | 第29-30页 |
| ·毕赤酵母的原生质体转化 | 第30页 |
| ·阳性转化子的表型筛选和菌落PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·Mut~s重组子的发酵筛选 | 第31页 |
| ·Mut~s和Mut~+重组子表达植酸酶的量以及酶学性质的比较研究 | 第31-34页 |
| 第四章、结果与分析 | 第34-39页 |
| ·质粒DNA的电泳检测 | 第34页 |
| ·质粒DNA的线性化 | 第34-35页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·标准磷曲线的绘制 | 第35-36页 |
| ·不同表型酵母工程菌表达植酸酶的表达量与诱导培养时间的关系 | 第36页 |
| ·Mut~s重组子和Mut~+重组子连续诱导表达产物的SDS-PAGE比较分析 | 第36-37页 |
| ·最适pH值的测定 | 第37页 |
| ·最适反应温度 | 第37-38页 |
| ·耐热性实验 | 第38-39页 |
| 第五章、讨论 | 第39-42页 |
| ·表达载体的转化和整合 | 第39-40页 |
| ·重组植酸酶表达量以及酶学性质变化分析 | 第40-42页 |
| 第六章、小结 | 第42-43页 |
| ·Mut~s重组子的获得 | 第42页 |
| ·不同表型的酵母工程菌对植酸酶表达的影响 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 主要缩略词表 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第51页 |
