| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 缩略词 | 第16-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-48页 |
| 1 问题的提出 | 第17-18页 |
| 2 植物离体保存研究进展 | 第18-31页 |
| ·植物种质资源离体保存研究现状 | 第18-23页 |
| ·常规组织培养技术保存种质 | 第19页 |
| ·缓慢生长保存 | 第19页 |
| ·超低温保存 | 第19-23页 |
| ·玻璃化超低温保存果树种质资源研究进展 | 第23-31页 |
| ·材料选择与预处理 | 第24-26页 |
| ·玻璃化保护剂处理 | 第26-28页 |
| ·冻存(Freezing) | 第28页 |
| ·化冻(THawing) | 第28-29页 |
| ·去装载(Unloading) | 第29页 |
| ·玻璃化超低温保存效果的评价 | 第29-31页 |
| 3 植物蛋白组学研究进展 | 第31-41页 |
| ·植物蛋白质组学研究概况 | 第31-35页 |
| ·蛋白质组学研究内涵 | 第31-32页 |
| ·植物蛋白组学的研究技术 | 第32-35页 |
| ·超低温保存中低温锻炼蛋白组学研究 | 第35-41页 |
| ·低温锻炼诱导的功能蛋白 | 第36-39页 |
| ·低温锻炼诱导的调节蛋白 | 第39-40页 |
| ·低温锻炼过程中蛋白质表达研究 | 第40-41页 |
| 4 龙眼、荔枝生物技术研究进展 | 第41-46页 |
| ·龙眼生物技术研究进展 | 第41-44页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发生 | 第42页 |
| ·龙眼离体器官发生 | 第42-43页 |
| ·龙眼基因工程研究进展 | 第43页 |
| ·龙眼体细胞发生过程蛋白质表达研究进展 | 第43页 |
| ·龙眼种质资源保存研究进展 | 第43-44页 |
| ·荔枝生物技术研究进展 | 第44-46页 |
| ·荔枝体细胞胚胎发生 | 第44-45页 |
| ·荔枝体细胞胚胎发生的细胞与分子生物学 | 第45-46页 |
| ·遗传转化 | 第46页 |
| ·荔枝种质超低温保存 | 第46页 |
| 5 本研究的内容及技术路线 | 第46-48页 |
| ·本研究的内容 | 第46-47页 |
| ·本研究的技术路线 | 第47-48页 |
| ·龙眼、荔枝胚性培养物玻璃化超低温保存技术体系 | 第47页 |
| ·低温预培养对龙眼胚性培养物超低温保存中蛋白质的影响 | 第47-48页 |
| 第二章 龙眼胚性培养物超低温保存 | 第48-75页 |
| 第一节 龙眼胚性愈伤组织的保持与球形胚高度同步化诱导 | 第48-51页 |
| 1 材料与方法 | 第48-49页 |
| ·供试材料 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织的继代保持及体胚发生能力检测 | 第49页 |
| ·龙眼高度同步化球形胚的诱导 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-50页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织的继代保持 | 第49-50页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织高度同步化球形胚的获得 | 第50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 第二节 龙眼胚性培养物玻璃化超低温保存 | 第51-59页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| ·供试材料 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-53页 |
| ·胚性培养物超低温保存 | 第52页 |
| ·化冻 | 第52页 |
| ·去装载 | 第52页 |
| ·细胞活力测定 | 第52-53页 |
| ·胚性培养物超低温保存后恢复生长 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-57页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织培养时间对超低温保存细胞存活率的影响 | 第53-54页 |
| ·不同化冻方式对龙眼胚性愈伤组织超低温保存后存活率的影响 | 第54-55页 |
| ·不同基因型龙眼胚性愈伤组织超低温保存对存活率的影响 | 第55页 |
| ·不同发育阶段龙眼胚性培养物对超低温保存细胞活力的影响 | 第55-56页 |
| ·龙眼胚性培养物玻璃化法超低温保存后的生长状况 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| ·继代培养时间对超低温保存后细胞存活率的影响 | 第57页 |
| ·化冻方式对超低温保存后细胞存活率的影响 | 第57-58页 |
| ·不同基因型龙眼超低温保存材料的选择与预培养 | 第58页 |
| ·玻璃化超低温保存龙眼胚性培养物的技术体系 | 第58-59页 |
| 第三节 龙眼胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的体胚发生及植株再生 | 第59-64页 |
| 1 材料与方法 | 第59-60页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·龙眼EC超低温保存后的保持 | 第59页 |
| ·龙眼EC球形胚超低温保存后的诱导 | 第59页 |
| ·龙眼EC超低温保存后子叶形胚的诱导 | 第59-60页 |
| ·龙眼EC超低温保存后子叶形胚的成熟培养 | 第60页 |
| ·植株再生培养 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织超低温保存后的继代保持 | 第60页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织超低温保存后的体胚发生与同步化调控 | 第60-62页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织超低温保存后的体胚成熟 | 第62-63页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织超低温保存后的植株再生 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| ·龙眼EC超低温保存后高频率体胚发生 | 第63-64页 |
| ·龙眼EC超低温保存后体胚成熟 | 第64页 |
| ·龙眼EC超低温保存后再生植株 | 第64页 |
| 第四节 龙眼胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的RAPD遗传稳定性检测 | 第64-75页 |
| 1 材料与方法 | 第65-69页 |
| ·供试材料 | 第65页 |
| ·仪器与试剂 | 第65-67页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·试验主要试剂 | 第65页 |
| ·主要溶液的配制 | 第65-67页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织基因组DNA的提取 | 第67页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织基因组DNA检测 | 第67-68页 |
| ·RAPD反应引物筛选 | 第68页 |
| ·RAPD-PCR扩增 | 第68页 |
| ·RAPD数据分析 | 第68页 |
| ·超低温保存前与超低温保存后的变异率 | 第68-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-73页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织DNA纯度及浓度分析 | 第69页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织DNA的琼脂糖凝胶电泳分析 | 第69-70页 |
| ·RAID引物筛选 | 第70页 |
| ·龙眼LC_2胚性愈伤组织超低温保存前后的RAPD检测 | 第70-71页 |
| ·龙眼DE胚性愈伤组织超低温保存前后的RAPD检测 | 第71-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| ·不同基因型对玻璃化超低温保存遗传变异的影响 | 第73-74页 |
| ·胚性愈伤组织玻璃化超低温保存遗传变异原因的分析 | 第74-75页 |
| 第三章 荔枝胚性愈伤组织超低温保存 | 第75-96页 |
| 第一节 荔枝胚性愈伤组织的诱导与保持 | 第75-78页 |
| 1 材料与方法 | 第75-76页 |
| ·供试材料 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织的继代保持 | 第76页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织的筛选与体胚发生能力的检测 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-77页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织的继代保持 | 第76页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织的筛选 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-78页 |
| 第二节 荔枝荔枝胚性愈伤组织超低温保存 | 第78-86页 |
| 1 材料与方法 | 第78-79页 |
| ·供试材料 | 第78页 |
| ·方法 | 第78-79页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织超低温保存预培养 | 第78页 |
| ·胚性愈伤组织超低温保存 | 第78-79页 |
| ·化冻 | 第79页 |
| ·去装载 | 第79页 |
| ·恢复生长 | 第79页 |
| ·细胞活力测定 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-83页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织超低温保存预培养的作用 | 第79-81页 |
| ·不同化冻方式对荔枝胚性愈伤组织超低温保存细胞存活率影响 | 第81页 |
| ·光照条件对荔枝胚性愈伤组织恢复生长的影响 | 第81-82页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后恢复生长 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-86页 |
| ·预培养在超低温保存中的双重效应 | 第83-84页 |
| ·超低温保存后材料的恢复生长 | 第84页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织玻璃化超低温保存的技术体系 | 第84-85页 |
| ·不同种属植物的特性与玻璃化超低温保材料的选择 | 第85-86页 |
| 第三节 荔枝胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的体胚发生及植株再生 | 第86-89页 |
| 1 材料与方法 | 第86页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·方法 | 第86页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织超低温保存后体细胞胚胎发生 | 第86页 |
| ·体胚成熟培养 | 第86页 |
| ·植株再生 | 第86页 |
| 2 结果与分析 | 第86-89页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织超低温保存后的体细胞胚胎发生 | 第86-87页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织超低温保存后的体细胞胚胎成熟 | 第87-88页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织超低温保存后的植株再生 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89页 |
| 第四节 荔枝胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的遗传稳定性检测 | 第89-96页 |
| 1 材料与方法 | 第89-92页 |
| ·供试材料 | 第89-90页 |
| ·仪器与试剂 | 第90页 |
| ·主要仪器设备 | 第90页 |
| ·试验主要试剂 | 第90页 |
| ·主要溶液 | 第90页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织基因组DNA的提取 | 第90页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织基因组DNA检测 | 第90-91页 |
| ·RAPD反应引物筛选 | 第91页 |
| ·RAPD-PCR扩增 | 第91页 |
| ·RAPD数据分析 | 第91页 |
| ·超低温保存前与超低温保存后的变异率 | 第91-92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-95页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织DNA纯度及浓度分析 | 第92页 |
| ·荔枝胚性愈伤组织DNA的琼脂糖凝胶电泳分析 | 第92-93页 |
| ·RAPD引物筛选 | 第93页 |
| ·胚性愈伤组织超低温保存前后的RAPD检测 | 第93-95页 |
| 3 讨论 | 第95-96页 |
| ·不同保存方式对离体保存遗传稳定性的影响 | 第95页 |
| ·植物离体保存遗传变异的传递性 | 第95-96页 |
| 第四章 低温预培养对龙眼胚性培养物超低温保存中蛋白质的影响 | 第96-123页 |
| 第一节 低温预培养对龙眼LC_2球形胚超低温保存后细胞活力的影响 | 第96-98页 |
| 1 材料与方法 | 第96-97页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·LC_2球形胚低温预培养 | 第97页 |
| ·龙眼球形胚细胞活力测定 | 第97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98页 |
| 第二节 龙眼球形胚低温预培养诱导特异表达蛋白的双向电泳分析 | 第98-111页 |
| 1 材料与方法 | 第98-102页 |
| ·供试材料 | 第98页 |
| ·仪器与试剂 | 第98-99页 |
| ·主要仪器设备 | 第98-99页 |
| ·试验主要试剂 | 第99页 |
| ·方法 | 第99-102页 |
| ·LC_2球形胚的低温预培养 | 第99页 |
| ·蛋白质样品的提取 | 第99页 |
| ·LC_2球形胚蛋白质样品双向电泳 | 第99-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-109页 |
| ·银染与考染在双向电泳蛋白点检测的比较 | 第102-103页 |
| ·LC_2球形胚低温预培养不同时间的培养物蛋白质双向电泳分析 | 第103-105页 |
| ·低温预培养对龙眼球形胚总蛋白的影响 | 第105-109页 |
| ·不同低温预培养时间龙眼球形胚蛋白表达的差异 | 第105-106页 |
| ·LC_2球形胚与5℃低温预培养1d的培养物蛋白质表达差异 | 第106页 |
| ·LC_2球形胚5℃低温预培养1d和2d的培养物蛋白质表达差异 | 第106-107页 |
| ·LC_2球形胚5℃低温预培养2d和4d的培养物蛋白质表达差异 | 第107-108页 |
| ·LC_2球形胚5℃低温预培养4d和6d的培养物蛋白质表达差异 | 第108-109页 |
| ·低温预培养对超低温保存细胞活力的影响与蛋白表达的关系 | 第109页 |
| 3 讨论 | 第109-111页 |
| ·银染在蛋白质双向电泳分析中的优势及操作要领 | 第109-110页 |
| ·低温锻炼对蛋白质的影响 | 第110-111页 |
| 第三节 低温预培养诱导特异蛋白的肽质量指纹(MALDI-TOF MS)分析 | 第111-123页 |
| 1 材料与方法 | 第111-112页 |
| ·材料 | 第111页 |
| ·肽的原位酶解 | 第111-112页 |
| ·银染凝胶的脱色 | 第111-112页 |
| ·酶解 | 第112页 |
| ·肽段的提取 | 第112页 |
| ·MALDI-TOF MS分析 | 第112页 |
| 2 结果与分析 | 第112-120页 |
| ·蛋白组分LLT1、LLT2的MALDI-TOF分析 | 第114-115页 |
| ·蛋白组分LLT3的MALDI-TOF分析 | 第115-119页 |
| ·蛋白组分LLT4的MALDI-TOF分析 | 第119-120页 |
| 3 讨论 | 第120-123页 |
| ·植物AFPs的特性 | 第120-121页 |
| ·LLT3可能是抗性蛋白 | 第121页 |
| ·LLT3可能是龙眼的AFPs | 第121页 |
| ·LLT4可能是龙眼中的果糖-1,6-二磷酸醛缩酶 | 第121-122页 |
| ·果糖-1,6-二磷酸醛缩酶与龙眼的抗冻性 | 第122-123页 |
| 总结 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-140页 |
| 附录Ⅰ | 第140-161页 |
| 附录Ⅱ | 第161-166页 |
| 在学期间发表得相关论文 | 第166-167页 |
| 致谢 | 第167页 |
