| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-42页 |
| 1 松材线虫及其危害 | 第17-19页 |
| ·分类地位 | 第17页 |
| ·形态特征 | 第17-18页 |
| ·起源与分布 | 第18页 |
| ·寄主范围及为害症状 | 第18页 |
| ·防治 | 第18-19页 |
| 2 香蕉穿孔线虫及其危害 | 第19-22页 |
| ·分类地位 | 第19-20页 |
| ·形态特征 | 第20页 |
| ·分布 | 第20页 |
| ·侵染及危害 | 第20-21页 |
| ·入侵风险 | 第21-22页 |
| ·控制与防治 | 第22页 |
| 3 植物寄生线虫FMRF酰胺类肽研究进展 | 第22-33页 |
| ·FMRF酰胺类肽(FMRFamide-related peptides) | 第23-24页 |
| ·植物线虫中FLP肽的多样性 | 第24-26页 |
| ·植物寄生线虫FLP功能及其研究方法 | 第26-33页 |
| ·利用免疫化学方法分析FLP功能 | 第26-28页 |
| ·利用原位杂交技术分析FLP功能 | 第28-30页 |
| ·利用基因沉默技术分析FLP功能 | 第30-32页 |
| ·利用RNAi防治植物线虫 | 第32-33页 |
| ·展望 | 第33页 |
| 4 植物寄生线虫分泌物研究进展 | 第33-40页 |
| ·植物寄生线虫的寄生方式 | 第33-34页 |
| ·植物寄生线虫分泌器官及其产物 | 第34-39页 |
| ·植物寄生线虫食道腺细胞 | 第34-35页 |
| ·食道腺细胞产生的分泌物及其功能 | 第35-38页 |
| ·侧器及其分泌物 | 第38页 |
| ·表皮及其分泌物 | 第38页 |
| ·直肠腺及其分泌物 | 第38页 |
| ·非蛋白信号 | 第38-39页 |
| ·展望 | 第39-40页 |
| 5 立题依据与技术路线 | 第40-42页 |
| ·立题依据 | 第40-41页 |
| ·技术路线 | 第41-42页 |
| 第二章 松材线虫FLP基因的克隆 | 第42-71页 |
| 1 材料与方法 | 第42-53页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·供试线虫培养与分离 | 第42页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·常用试剂配制 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-53页 |
| ·总RNA提取 | 第43-44页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第44页 |
| ·FLP基因片段的克隆 | 第44-45页 |
| ·扩增片段的回收,克隆、测序 | 第45-47页 |
| ·RACE获得全长cDNA | 第47-50页 |
| ·3'RACE与5'RACE PCR产物的回收,克隆测序 | 第50页 |
| ·DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增全长基因及内含子检测 | 第51页 |
| ·TAIL-PCR扩增flp基因5'-侧翼序列 | 第51-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-68页 |
| ·RNA的质量 | 第53-54页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第54页 |
| ·目的基因RACE结果与分析 | 第54-58页 |
| ·目的基因cDNA全长序列及预测的氨基酸序列 | 第58-62页 |
| ·目的基因内含子检测及5'侧翼序列的获得 | 第62-68页 |
| ·松材线虫DNA的检测 | 第62页 |
| ·目的基因内含子检测 | 第62-64页 |
| ·5'侧翼序列的获得 | 第64-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| ·利用RACE扩增全长cDNA序列 | 第68页 |
| ·FMRF酰胺类肽的选择性剪辑 | 第68-69页 |
| ·5'-侧翼序列的获得 | 第69-71页 |
| ·TAIL-PCR | 第69页 |
| ·松材线虫flp基因5'-侧翼序列 | 第69-71页 |
| 第三章 松材线虫FLP基因的表达分析 | 第71-85页 |
| 1 材料与方法 | 第71-74页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·供试材料 | 第71页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第71页 |
| ·溶液配制 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·探针合成 | 第72-73页 |
| ·线虫处理 | 第73页 |
| ·预杂交、杂交 | 第73页 |
| ·洗虫与显色检测 | 第73-74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-81页 |
| ·探针检测 | 第74页 |
| ·原位杂交结果检测 | 第74-81页 |
| ·Bx-flp-1的原位杂交结果 | 第75页 |
| ·Bx-flp-2的原位杂交结果 | 第75-76页 |
| ·Bx-flp-3a的原位杂交结果 | 第76-77页 |
| ·Bx-flp-3b原位杂交结果 | 第77-78页 |
| ·Bx-flp-6的原位杂交结果 | 第78-79页 |
| ·Bx-flp-12的原位杂交结果 | 第79-80页 |
| ·Bx-flp-14的原位杂交结果 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-85页 |
| 第四章 松材线虫FLP基因的功能验证 | 第85-98页 |
| 1 材料与方法 | 第85-91页 |
| ·材料 | 第85-86页 |
| ·方法 | 第86-91页 |
| ·FMRF酰胺类肽基因(Bx-flp)的部分片断PCR扩增 | 第86-87页 |
| ·载体构建 | 第87-88页 |
| ·质粒提取 | 第88页 |
| ·T7引物PCR扩增及产物纯化 | 第88-89页 |
| ·体外转录合成dsRNA | 第89页 |
| ·dsRNA处理线虫 | 第89-90页 |
| ·QPCR分析 | 第90-91页 |
| ·RNAi表型分析 | 第91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-96页 |
| ·dsRNA的合成 | 第91-92页 |
| ·Bx-flp片段的PCR扩增 | 第91页 |
| ·合成dsRNA | 第91-92页 |
| ·QPCR结果分析 | 第92-96页 |
| ·熔点曲线的确定 | 第92-93页 |
| ·标准曲线的建立 | 第93-94页 |
| ·RNAi后转录水平分析 | 第94-95页 |
| ·靶标基因的RNAi表型鉴定 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-98页 |
| 第五章 香蕉穿孔线虫纤维素酶基因RS-ENG-1克隆及特征分析 | 第98-124页 |
| 1 材料和方法 | 第99-109页 |
| ·材料 | 第99页 |
| ·方法 | 第99-109页 |
| ·cDNA的合成 | 第99页 |
| ·目的基因片段的克隆 | 第99-100页 |
| ·RACE获得全长cDNA | 第100-103页 |
| ·Rs-eng-1基因内含子的扩增 | 第103-104页 |
| ·Rs-eng-1基因的Southern杂交 | 第104-108页 |
| ·Rs-eng-1基因表达的原位杂交 | 第108-109页 |
| 2 结果与分析 | 第109-122页 |
| ·RNA的提取 | 第109页 |
| ·cDNA全长的获得 | 第109页 |
| ·目的基因的cDNA全长序列及预测的氨基酸序列 | 第109-112页 |
| ·目的基因的命名和生物信息学分析 | 第112-114页 |
| ·系统发育树的构建 | 第114-115页 |
| ·Rs-eng-1基因内含子扩增结果与分析 | 第115-120页 |
| ·DNA的提取 | 第115页 |
| ·内含子的扩增 | 第115-118页 |
| ·内含子的比对分析 | 第118-120页 |
| ·Rs-eng-1基因的Southern结果与分析 | 第120-122页 |
| ·DNA的质量及酶切效果检测 | 第120-121页 |
| ·Southern结果与分析 | 第121-122页 |
| ·原位杂交结果与分析 | 第122页 |
| 3 讨论 | 第122-124页 |
| 第六章 香蕉穿孔线虫纤维素酶基因RS-ENG-1的原核表达和真核表达 | 第124-140页 |
| 1 材料和方法 | 第124-130页 |
| ·材料 | 第124-125页 |
| ·方法 | 第125-130页 |
| ·Rs-eng-1基因的原核表达 | 第125-128页 |
| ·Rs-eng-1基因的真核表达 | 第128-130页 |
| 2 结果与分析 | 第130-138页 |
| ·基因原核表达结果与分析 | 第130-135页 |
| ·目的片段的鉴定 | 第130-132页 |
| ·Rs-eng-1基因的原核表达 | 第132-135页 |
| ·Rs-eng-1真核表达 | 第135-138页 |
| ·重组酵母表达载体pPIC9K-Rs-eng-1的构建及鉴定 | 第135页 |
| ·酵母的转化及筛选 | 第135-136页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第136-137页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第137-138页 |
| ·表达产物活性分析 | 第138页 |
| 3 讨论 | 第138-140页 |
| 第七章 利用RNAI方法研究香蕉穿孔线虫RS-ENG-1基因功能 | 第140-158页 |
| 1 材料与方法 | 第140-145页 |
| ·材料 | 第140页 |
| ·方法 | 第140-145页 |
| ·香蕉穿孔线虫离体RNAi | 第140-142页 |
| ·番茄介导的RNA干扰线虫作用 | 第142-145页 |
| 2 结果与分析 | 第145-155页 |
| ·浸泡体系的建立 | 第145-151页 |
| ·QPCR检测Rs-eng-1表达量的差异 | 第146页 |
| ·Rs-eng-1 dsRNA对香蕉穿孔线虫体内纤维素酶活性的影响 | 第146-147页 |
| ·沉默Rs-eng-1后表型鉴定 | 第147-148页 |
| ·目的基因RNA干扰载体的构建 | 第148-150页 |
| ·抗生素浓度的筛选 | 第150页 |
| ·转基因番茄的获得 | 第150-151页 |
| ·转基因番茄的鉴定 | 第151-155页 |
| ·转基因植株的Southern检测 | 第151-152页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第152-153页 |
| ·T1代遗传稳定性检测 | 第153页 |
| ·接种香蕉穿孔线虫的抗性检测 | 第153-154页 |
| ·接种南方根结线虫的抗性检测 | 第154-155页 |
| 3 讨论 | 第155-158页 |
| 第八章 全文总结 | 第158-161页 |
| 参考文献 | 第161-176页 |
| 英文缩略表 | 第176-177页 |
| 致谢 | 第177-178页 |
| 作者简历 | 第178页 |
