| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 一、前言 | 第8-22页 |
| 1. 人角质细胞生长因子-2概况 | 第8-13页 |
| ·KGF-2的来源和基因结构 | 第8-9页 |
| ·KGF-2的受体 | 第9-10页 |
| ·KGF-2的生物学功能 | 第10-13页 |
| ·KGF-2的致癌性研究 | 第13页 |
| 2. 小泛素相关修饰物SUMO简介 | 第13-20页 |
| ·SUMO的分类和结构 | 第14-15页 |
| ·SUMO的生化反应途径 | 第15-17页 |
| ·SUMO化的生物学功能 | 第17-20页 |
| 3. 研究背景与技术路线 | 第20-22页 |
| 二、实验材料与设备 | 第22-28页 |
| 1. 主要设备和器材 | 第22-23页 |
| 2. 常用试剂 | 第23页 |
| 3. DNA及蛋白材料 | 第23页 |
| 4. 实验菌株及细胞株 | 第23页 |
| 5. 培养基与抗生素 | 第23-24页 |
| 6. 实验试剂 | 第24-28页 |
| 三、方法与步骤 | 第28-42页 |
| 1. 引物的设计 | 第28页 |
| 2. 重组质粒的构建 | 第28-34页 |
| 3. 重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| 4. KGF-2融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第35-38页 |
| 5. 融合蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 6. Western Blotting | 第39页 |
| 7. BCA法测定蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 8. 生物学活性检测(MTT法) | 第40-42页 |
| 四、结果分析 | 第42-57页 |
| 1. 目的基因的扩增 | 第42-45页 |
| 2. 重组质粒的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| 3. 融和蛋白的表达 | 第46-52页 |
| 4. SUMO-KGF-2的分离纯化 | 第52页 |
| 5. SUMO-KGF-2的酶切和KGF-2的纯化 | 第52-53页 |
| 6. Western blotting鉴定 | 第53-54页 |
| 7. BCA法测定蛋白浓度 | 第54-55页 |
| 8. 融和蛋白SUMO-KGF-2和单体蛋白KGF-2促分裂活性分析 | 第55-57页 |
| 五、讨论 | 第57-61页 |
| 1. 原核表达载体的选择 | 第57页 |
| 2. 大肠杆菌表达菌株的选择 | 第57-58页 |
| 3. 融合标签和分子伴侣的选择 | 第58-59页 |
| 4. 目的蛋白的表达 | 第59页 |
| 5. 目的蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 6. 生物活性的检测 | 第60-61页 |
| 六、结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72页 |