| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-43页 |
| 1.脂肪细胞 | 第15-29页 |
| ·概述 | 第15-17页 |
| ·脂肪细胞和脂肪组织的起源 | 第17-18页 |
| ·脂肪细胞的分化调控 | 第18-25页 |
| ·脂肪细胞分化过程 | 第18-20页 |
| ·脂肪细胞分化的转录调控 | 第20-25页 |
| ·脂肪细胞的功能 | 第25-26页 |
| ·脂肪细胞与炎症 | 第26-29页 |
| ·脂肪细胞与巨噬细胞 | 第26-28页 |
| ·肥胖和炎症 | 第28-29页 |
| 2.脂肪细胞因子 | 第29-32页 |
| ·瘦素(Leptin) | 第30页 |
| ·肿瘤坏死因子(TNFα) | 第30-31页 |
| ·白介素6(IL-6) | 第31页 |
| ·脂联素/ACRP30 | 第31-32页 |
| 3.抗素 | 第32-43页 |
| ·抗素的发现 | 第32-33页 |
| ·抗素的结构生物学 | 第33-35页 |
| ·糖脂代谢中抗素的作用 | 第35-38页 |
| ·抗素和肥胖 | 第35-36页 |
| ·抗素,胰岛素抵抗和2型糖尿病 | 第36-38页 |
| ·抗素基因表达的调控 | 第38-41页 |
| ·胰岛素增敏剂对抗素的调控 | 第38-40页 |
| ·抗素表达的性别差异 | 第40页 |
| ·抗素基因的转录调控 | 第40-41页 |
| ·遗传学研究 | 第41-42页 |
| ·抗素在炎症和疾病发生中的作用 | 第42-43页 |
| 第二章 小鼠抗素选择性剪切体的鉴定和组织分布 | 第43-55页 |
| 1.前言 | 第43-44页 |
| 2.实验材料与试剂 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验动物 | 第44页 |
| ·样品采集 | 第44页 |
| ·菌株及质粒 | 第44页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第44-45页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·主要溶液配制 | 第45页 |
| 3.实验方法 | 第45-49页 |
| ·组织样品总RNA提取 | 第45-46页 |
| ·总RNA纯化 | 第46页 |
| ·总RNA纯度鉴定 | 第46页 |
| ·目标片段的扩增与纯化 | 第46-48页 |
| ·抗素剪切体扩增引物 | 第46-48页 |
| ·抗素剪切体的扩增 | 第48页 |
| ·抗素剪切体的组织分布 | 第48-49页 |
| ·数据统计分析 | 第49页 |
| 4.结果与分析 | 第49-51页 |
| ·小鼠抗素选择性剪切体的克隆 | 第49-50页 |
| ·小鼠抗素基因选择性剪切体的组织分布 | 第50-51页 |
| 5.讨论 | 第51-55页 |
| 第三章 抗素基因转录的调控 | 第55-75页 |
| 1.前言 | 第55页 |
| 2.实验材料与试剂 | 第55-56页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第55-56页 |
| 3.实验方法 | 第56-60页 |
| ·总DNA提取 | 第56页 |
| ·总RNA提取和纯化 | 第56页 |
| ·SREBP1c、CREB、C/EBPα和抗素及其启动子区域基因片段的扩增 | 第56页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·PCR扩增条件 | 第56页 |
| ·SREBP1c、CREB和C/EBPα真核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·抗素及启动子序列真核表达载体的构建 | 第57页 |
| ·质粒的大量提取 | 第57-58页 |
| ·质粒浓度和纯度检测 | 第58页 |
| ·细胞培养条件 | 第58-59页 |
| ·实验细胞分组 | 第59页 |
| ·基因转染 | 第59页 |
| ·激素及其衍生物处理 | 第59页 |
| ·瞬时和稳定转染 | 第59页 |
| ·抗素转录调控的分析 | 第59-60页 |
| ·抗素及相关基因表达调控的分析 | 第60页 |
| ·数据统计分析 | 第60页 |
| 4.结果与分析 | 第60-71页 |
| ·SREBP1c、CREB和C/EBPα对抗素启动子活性的作用研究 | 第60-69页 |
| ·SREBP1c、CREB和C/EBPα编码区片段的克隆 | 第60-61页 |
| ·抗素编码区及其启动子区的克隆 | 第61-62页 |
| ·SREBP1c、CREB和C/EBPα真核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·抗素及其启动子区真核表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·SREBP1c和CREB对抗素的转录无调控作用 | 第65-66页 |
| ·C/EBPα激活抗素的转录 | 第66-68页 |
| ·C/EBPα激活抗素启动子 | 第68-69页 |
| ·激素及其功能衍生物对抗素的表达调控 | 第69-71页 |
| ·胰岛素对抗素的表达调控 | 第69页 |
| ·克伦特罗对抗素的表达调控 | 第69-70页 |
| ·地噻米松对抗素的表达调控 | 第70-71页 |
| ·脂多糖和罗格列酮对抗素的表达调控 | 第71页 |
| 5.讨论 | 第71-75页 |
| ·关于抗素的转录调控 | 第71-73页 |
| ·激素及其功能衍生物对抗素转录的影响 | 第73-75页 |
| 第四章 抗素对肝细胞葡萄糖代谢的作用 | 第75-85页 |
| 1.前言 | 第75页 |
| 2.实验材料与试剂 | 第75页 |
| ·实验细胞 | 第75页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第75页 |
| 3.实验方法 | 第75-78页 |
| ·抗素基因真核表达载体的构建 | 第75页 |
| ·质粒的大量提取 | 第75-76页 |
| ·质粒浓度和纯度检测 | 第76页 |
| ·L-02细胞培养 | 第76页 |
| ·实验分组 | 第76页 |
| ·抗素基因转染肝细胞 | 第76-77页 |
| ·细胞RNA提取和纯化 | 第77页 |
| ·细胞蛋白浓度检测 | 第77页 |
| ·培养基葡萄糖浓度检测 | 第77页 |
| ·基因表达调控的分析 | 第77页 |
| ·数据统计分析 | 第77-78页 |
| 4.结果和分析 | 第78-83页 |
| ·抗素编码区的克隆 | 第78页 |
| ·包含抗素的真核表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·抗素基因在L-02细胞中实现超表达 | 第79-80页 |
| ·抗素显著抑制胰岛素诱导的葡萄糖摄取 | 第80-81页 |
| ·罗格列酮抑制抗素的功能 | 第81页 |
| ·抗素对葡萄糖代谢相关基因的表达影响 | 第81-82页 |
| ·抗素对胰岛素信号相关基因的表达影响 | 第82-83页 |
| ·罗格列酮对抗素调控的葡萄糖摄取的影响 | 第83页 |
| 5.讨论 | 第83-85页 |
| 第五章 脂肪细胞分泌因子和重组抗素与肝细胞的胰岛素抗性 | 第85-107页 |
| 1.前言 | 第85-86页 |
| 2.实验材料与试剂 | 第86页 |
| ·实验细胞 | 第86页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第86页 |
| 3.实验方法 | 第86-87页 |
| ·HepG2细胞培养 | 第86页 |
| ·脂肪细胞条件培养基制备 | 第86页 |
| ·细胞蛋白提取 | 第86页 |
| ·细胞蛋白浓度检测 | 第86页 |
| ·SDS-PAGE和Western杂交 | 第86-87页 |
| ·ELISA检测 | 第87页 |
| ·数据统计分析 | 第87页 |
| 4.结果和分析 | 第87-104页 |
| ·脂肪细胞分泌因子降低肝细胞胰岛素敏感性 | 第87-89页 |
| ·脂肪细胞分泌因子不改变肝细胞中Akt和GSK3的表达量 | 第89-91页 |
| ·脂联素、曲格列酮对脂肪细胞分泌因子作用的影响 | 第91-94页 |
| ·重组抗素能够模拟脂肪细胞分泌因子的作用 | 第94-99页 |
| ·脂联素、曲格列酮对重组抗素作用的影响 | 第99-102页 |
| ·重组抗素与脂肪细胞分泌因子在功能上具有加合作用 | 第102-104页 |
| 5.讨论 | 第104-107页 |
| 第六章 重组抗素对肝细胞中激酶磷酸化的影响 | 第107-123页 |
| 1.前言 | 第107-108页 |
| 2.实验材料与试剂 | 第108页 |
| ·实验细胞 | 第108页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第108页 |
| 3.实验方法 | 第108页 |
| ·HepG2细胞培养 | 第108页 |
| ·细胞蛋白提取 | 第108页 |
| ·细胞蛋白浓度检测 | 第108页 |
| ·SDS-PAGE和Western杂交 | 第108页 |
| ·数据统计分析 | 第108页 |
| 4.结果和分析 | 第108-120页 |
| ·重组抗素增强Erk1/2的磷酸化 | 第108-112页 |
| ·重组抗素增强p65的表达 | 第112-114页 |
| ·重组抗素抑制AMPK和ACC的磷酸化 | 第114-120页 |
| 5.讨论 | 第120-123页 |
| 结论和创新点 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
