| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-32页 |
| ·植物体中有机酸代谢及功能 | 第13-14页 |
| ·苹果果实中有机酸代谢 | 第14-16页 |
| ·苹果果实中有机酸的种类 | 第14页 |
| ·苹果果实发育过程中有机酸含量的变化 | 第14页 |
| ·苹果果实中苹果酸代谢途径 | 第14-16页 |
| ·苹果果实酸/低酸性状遗传研究 | 第16-17页 |
| ·苹果酸代谢关键酶研究进展 | 第17-30页 |
| ·磷酸烯醇丙酮酸羧化酶（PEPC）研究进展 | 第17-20页 |
| ·NAD-苹果酸脱氢酶（NAD–MDH）研究进展 | 第20-21页 |
| ·细胞质NADP–苹果酸酶（NADP–ME）研究进展 | 第21-25页 |
| ·植物液泡膜H~+–ATPase 研究进展 | 第25-28页 |
| ·植物液泡膜H~+–PPase 研究进展 | 第28-30页 |
| ·本研究的目的意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-49页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·PCR 引物 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-49页 |
| ·苹果果实中苹果酸含量的测定 | 第34-35页 |
| ·热硼酸法提取RNA | 第35-36页 |
| ·RNA 含量和纯度检测 | 第36页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第36-37页 |
| ·反转录产物质量检测 | 第37页 |
| ·cDNA 纯化 | 第37页 |
| ·cDNA 末端加尾 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增条件和程序 | 第38-42页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第42页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第42-45页 |
| ·cDNA 序列测定 | 第45页 |
| ·原核表达细胞质型苹果酸酶蛋白 | 第45-47页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第47-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-64页 |
| ·苹果果实不同发育阶段苹果酸含量测定 | 第49-50页 |
| ·RNA 的提取和质量检测 | 第50页 |
| ·反转录产物质量检测 | 第50-51页 |
| ·苹果细胞质型NADP–ME 基因(M–ME)的克隆与表达分析 | 第51-55页 |
| ·苹果细胞质型NADP–ME 基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·M-ME 序列分析 | 第52-54页 |
| ·M-ME 原核表达分析 | 第54-55页 |
| ·磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）CDNA 片断的克隆 | 第55页 |
| ·液泡膜H~+–ATPASE A 亚基基因（VHA–A）的克隆及序列分析 | 第55-58页 |
| ·液泡膜H~+–ATPase A 亚基基因的克隆 | 第55-56页 |
| ·VHA–A 序列分析 | 第56-58页 |
| ·液泡膜H~+–PPASE 基因（V–PPI）克隆及序列分析 | 第58-60页 |
| ·液泡膜H~+–PPase 基因的克隆 | 第58页 |
| ·V–PPi 氨基酸序列分析 | 第58-60页 |
| ·定量PCR 结果分析 | 第60-64页 |
| ·PEPC 定量PCR 分析 | 第60-61页 |
| ·M–ME 定量PCR 分析 | 第61-62页 |
| ·MVA–A 定量PCR 分析 | 第62-63页 |
| ·M–PPi 定量PCR 分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-74页 |
| ·苹果果实中有机酸的积累模式 | 第64-65页 |
| ·苹果果实中糖、酸代谢和影响因素 | 第65-66页 |
| ·苹果酸代谢和储藏关键酶基因的序列分析 | 第66-68页 |
| ·苹果酸不同积累模式形成的可能机制 | 第68-74页 |
| 参考文献 | 第74-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第94页 |
