| 缩写词索引 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-40页 |
| 第一章 传染性法氏囊病病毒的分子生物学研究进展 | 第18-26页 |
| 1 IBDV基因组结构和编码蛋白的功能 | 第18-21页 |
| ·RNA依赖的RNA聚合酶VP1 | 第18-19页 |
| ·衣壳蛋白pVP2、VP2与4条多肽 | 第19页 |
| ·衣壳蛋白VP3 | 第19-20页 |
| ·蛋白酶VP4 | 第20页 |
| ·非结构蛋白VP5 | 第20页 |
| ·5 ’-NCR和3’-NCR | 第20-21页 |
| 2 IBDV在宿主细胞中的复制机理 | 第21-24页 |
| ·IBDV的感染宿主 | 第21页 |
| ·病毒吸附及侵入细胞 | 第21-22页 |
| ·基因组转录与翻译的调控 | 第22页 |
| ·病毒RNA的复制和蛋白合成 | 第22-23页 |
| ·病毒蛋白的成熟和粒子的装配 | 第23页 |
| ·病毒粒子的释放 | 第23-24页 |
| 3 IBDV的分子致病机理 | 第24-26页 |
| 第二章 蛋白质组学在病毒研究中的应用 | 第26-38页 |
| 1 蛋白质组学 | 第26-29页 |
| ·概述 | 第26页 |
| ·蛋白分离技术 | 第26-27页 |
| ·生物质谱技术 | 第27-29页 |
| ·生物信息学分析 | 第29页 |
| 2 蛋白质组学在病毒研究中的应用 | 第29-38页 |
| ·研究病毒粒子的蛋白质组成 | 第29-32页 |
| ·大通量研究病毒蛋白的结构 | 第32-33页 |
| ·研究蛋白质的相互作用 | 第33-34页 |
| ·研究病毒感染引起的细胞蛋白质组变化 | 第34-38页 |
| 研究目的和方案 | 第38-40页 |
| 第二部分 研究内容 | 第40-136页 |
| 第一章 IBDV-VP1的原核表达和抗体制备 | 第40-60页 |
| 1 引言 | 第40-41页 |
| 2 材料和方法 | 第41-50页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·病毒的增殖、纯化和电镜观察 | 第42页 |
| ·长距离RT-PCR扩增病毒基因组B节段cDNA | 第42-44页 |
| ·VP1原核表达载体构建 | 第44-45页 |
| ·重组VP1蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| ·重组VP1蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·抗rVP1单克隆抗体制备 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体腹水特异性鉴定 | 第47页 |
| ·单克隆抗体Ig类别、亚类及效价测定 | 第47页 |
| ·单克隆抗体表位相关性分析 | 第47-48页 |
| ·抗rVP1蛋白多抗血清制备 | 第48-49页 |
| ·免疫细胞化学 | 第49页 |
| ·石蜡切片制作和免疫组织化学 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-59页 |
| ·基因组B节段全长cDNA的克隆和序列分析 | 第50-52页 |
| ·VP1原核表达和纯化 | 第52-54页 |
| ·抗rVP1蛋白单克隆和多克隆抗体制备 | 第54-59页 |
| 4 讨论 | 第59页 |
| 5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第二章 IBDV编码蛋白的亚细胞定位 | 第60-78页 |
| 1 引言 | 第60-61页 |
| 2 材料和方法 | 第61-64页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·VP1真核表达载体构建 | 第61-62页 |
| ·超纯质粒的提取 | 第62页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第62-63页 |
| ·免疫荧光技术 | 第63页 |
| ·免疫荧光双标技术 | 第63页 |
| ·DAPI染核 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-74页 |
| ·VP1的亚细胞分布 | 第64-67页 |
| ·VP1与IBDV其他编码蛋白的定位关系 | 第67-71页 |
| ·IBDV感染细胞内VP2、VP3和VP4之间的定位关系 | 第71-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| ·胞浆内颗粒状VP1与IBDV感染过程有关 | 第74-75页 |
| ·VP4特征性的胞浆和核内分布 | 第75页 |
| ·各编码蛋白之间的定位和功能关系 | 第75-76页 |
| 5 本章小结 | 第76-78页 |
| 第三章 IBDV感染CEF的差异蛋白质组分析 | 第78-118页 |
| 1 引言 | 第78-79页 |
| 2 材料和方法 | 第79-88页 |
| ·细胞和病毒 | 第79页 |
| ·仪器和软件 | 第79页 |
| ·试剂 | 第79-80页 |
| ·抗体 | 第80页 |
| ·样品制备 | 第80-81页 |
| ·固相pH梯度双向凝胶电泳 | 第81-82页 |
| ·银染 | 第82-83页 |
| ·图像扫描和PDQuest软件分析 | 第83-84页 |
| ·挖点和胶内酶解 | 第84-85页 |
| ·质谱分析和数据库检索 | 第85页 |
| ·实时RT-PCR | 第85-88页 |
| ·Western blot验证 | 第88页 |
| 3 结果 | 第88-112页 |
| ·CEF双向凝胶电泳方法的建立 | 第88-91页 |
| ·IBDV感染CEF的2-DE差异表达背景 | 第91-97页 |
| ·差异表达蛋白的质谱鉴定 | 第97-107页 |
| ·差异表达蛋白的分类 | 第107-108页 |
| ·差异表达蛋白转录本分析 | 第108-111页 |
| ·差异表达蛋白的Western blot验证 | 第111-112页 |
| 4 讨论 | 第112-116页 |
| ·IBDV感染改变了宿主细胞骨架 | 第112-113页 |
| ·IBDV感染劫持了宿主的翻译机制 | 第113-114页 |
| ·IBDV感染引起UPP通路的紊乱 | 第114页 |
| ·病毒感染和细胞应激反应 | 第114页 |
| ·病毒感染和RNA加工、大分子合成和能量代谢的抑制 | 第114-115页 |
| ·Apolipoprotein A-I、Rho-GDI和Actin细胞骨架 | 第115-116页 |
| 5 本章小结 | 第116-118页 |
| 第四章 IBDV感染对宿主细胞骨架的影响 | 第118-136页 |
| 1 引言 | 第118-119页 |
| 2 材料和方法 | 第119-122页 |
| ·质粒、抗体与试剂 | 第119-120页 |
| ·细胞培养和病毒感染 | 第120页 |
| ·F-actin染色 | 第120页 |
| ·荧光双标染色 | 第120页 |
| ·真核转染 | 第120-121页 |
| ·免疫共沉淀分析 | 第121页 |
| ·F-actin细胞骨架的提取和分析 | 第121页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的胶体考染 | 第121页 |
| ·药物cytoD处理 | 第121-122页 |
| ·TCID_(50)测定 | 第122页 |
| 3 结果 | 第122-133页 |
| ·微丝在感染细胞中的结构变化 | 第122-123页 |
| ·微管在感染细胞中的结构变化 | 第123-124页 |
| ·Vimentin中间丝在感染细胞中的结构变化 | 第124-125页 |
| ·VP4与F-actin在感染细胞中的定位关系 | 第125-126页 |
| ·VP4在真核转染细胞中的分布 | 第126-127页 |
| ·VP4在真核转染细胞中与F-actin的定位关系 | 第127页 |
| ·Triton X-100可溶形式下VP4和β-actin的关系 | 第127-128页 |
| ·Triton X-100不溶性细胞骨架成分中VP4的含量 | 第128-129页 |
| ·药物cytoD处理对病毒产量和释放的影响 | 第129-133页 |
| 4 讨论 | 第133-135页 |
| ·Vimentin中间丝与蛋白水解酶 | 第133页 |
| ·宿主细胞F-actin与含VP4的Ⅱ型管状结构有关 | 第133-134页 |
| ·F-actin在IBDV感染细胞中发挥重要作用 | 第134页 |
| ·核内F-actin及VP4的出现与IBDV致病机理 | 第134-135页 |
| 5 本章小结 | 第135-136页 |
| 第三部分 结论和展望 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-158页 |
| 附录A 常用缓冲液及培养基配方 | 第158-168页 |
| 附录B 个人简历及攻博期间研究成果 | 第168-170页 |
| 致谢 | 第170页 |
