| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 1 研究背景 | 第11-15页 |
| ·生长抑素及其类似物 | 第11页 |
| ·生长抑素受体 | 第11-12页 |
| ·生长抑素及其类似物治疗肿瘤 | 第12-13页 |
| ·胰腺癌SSTR2的基因治疗 | 第13-15页 |
| 2 研究目的和意义 | 第15页 |
| 3 研究内容 | 第15-16页 |
| 4 研究技术路线 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-40页 |
| 1 实验材料 | 第17-19页 |
| ·质粒 | 第17页 |
| ·菌株 | 第17页 |
| ·细胞 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·基因工程主要试剂 | 第18页 |
| ·细胞培养主要试剂 | 第18页 |
| ·Westorn blot和免疫组织化学所需试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-40页 |
| ·DH5α大肠细菌感受态的制备 | 第20页 |
| ·质粒的转化和扩增 | 第20页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第20-21页 |
| ·转化质粒的酶切鉴定 | 第21-22页 |
| ·酶切鉴定 | 第21页 |
| ·PCR清洁试剂盒回收酶切反应产物 | 第21页 |
| ·回收的DNA片段再用SalⅠ进行酶切 | 第21-22页 |
| ·pDC316-SSTR2、pDC316-LacZ重组子的构建 | 第22-27页 |
| ·pDC316-SSTR2的构建 | 第23-25页 |
| ·pDC316-lacZ重组子的构建 | 第25-26页 |
| ·重组穿梭质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·复制缺陷型腺病毒的重组 | 第27-30页 |
| ·pDC316-SSTR2、pDC316-LacZ、pFG140和pBHGlox(△)E1,3Cre的转化、提取和鉴定 | 第28页 |
| ·HEK293细胞培养 | 第28页 |
| ·HEK293细胞的准备 | 第28页 |
| ·位点特异性重组构建SSTR2和LacZ基因腺病毒载体 | 第28-29页 |
| ·脂质体介导pDC316-SSTR2和pBHGloxdeltaE1,3Cre共转染293细 | 第28-29页 |
| ·脂质体介导pDC316-LacZ和pBHGloxdeltaE1,3Cre共转染293细胞 | 第29页 |
| ·重组腺病毒的收获 | 第29页 |
| ·阳性重组克隆的筛选和扩增 | 第29-30页 |
| ·重组腺病毒的Ad-SSTR2和Ad-LacZ鉴定 | 第30-33页 |
| ·提取病毒DNA | 第30页 |
| ·重组腺病毒的PCR鉴定 | 第30-32页 |
| ·293细胞裂解液Western blot鉴定Ad-SSTR2的感染情况 | 第32-33页 |
| ·hSSTR2基因腺病毒载体的扩增与滴度测定 | 第33-35页 |
| ·重组腺病毒Ad-SSTR2的大量扩增和保存 | 第33页 |
| ·重组腺病毒Ad-SSTR2的纯化 | 第33-34页 |
| ·重组腺病毒滴度测定 | 第34-35页 |
| ·重组腺病毒的感染力测定 | 第35页 |
| ·RT-PCR检测Ad-SSTR2在Capan-2中的表达 | 第35-37页 |
| ·Westorn blot和免疫细胞化学鉴定Ad-SSTR2在胰腺癌细胞中的表达 | 第37-38页 |
| ·重组腺病毒Ad-SSTR2对胰腺癌细胞Capan-2细胞增殖的影响 | 第38-39页 |
| ·统计学分析 | 第39-40页 |
| 结果 | 第40-52页 |
| 1.腺病毒穿梭质粒载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.腺病毒载体的位置特异性重组 | 第41-42页 |
| 3.重组腺病毒的鉴定 | 第42-44页 |
| ·PCR | 第42-44页 |
| ·Western blot | 第44页 |
| 4 重组腺病毒的扩增、纯化与滴度测定 | 第44-45页 |
| ·Ad-SSTR2的扩增 | 第44页 |
| ·Ad-SSTR2收集、纯化 | 第44页 |
| ·倍比稀释法测定Ad-SSTR2的空斑形成单位以评估转染液病毒滴度 | 第44-45页 |
| 5 重组腺病毒感染力测定 | 第45-46页 |
| 6 RT-PCR检测Ad-SSTR2在Capan-2中的表达 | 第46-47页 |
| 7 Western blot和免疫细胞化学检测SSTR2蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 8 病毒对capan-2细胞增殖的影响 | 第48-52页 |
| 讨论 | 第52-60页 |
| 1 SST与SSTR | 第52页 |
| 2 基因转染方法的选择 | 第52-53页 |
| 3 病毒载体的选择 | 第53页 |
| 4 腺病毒载体的构建 | 第53-55页 |
| 5 AdCMV-hSSTR2的构建和鉴定 | 第55-57页 |
| 6 AdCMV-hSSTR2在Capan-2细胞中的表达 | 第57-58页 |
| 7 重组腺病毒对capan-2细胞增殖的影响 | 第58-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
