苎麻花叶病毒cDNA文库的构建及初步分析
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 前言 | 第8-25页 |
| ·苎麻的生产及利用价值 | 第8页 |
| ·苎麻花叶病毒的研究进展 | 第8-9页 |
| ·症状及传播方式 | 第8-9页 |
| ·病毒粒子形态及其分类地位 | 第9页 |
| ·长线形病毒科成员特征 | 第9-16页 |
| ·长线形病毒科成员的生物学特征 | 第9-10页 |
| ·长线形病毒科成员的分类 | 第10-11页 |
| ·长线形病毒科成员的基因组结构 | 第11-12页 |
| ·长线形病毒科成员编码蛋白的特征 | 第12-16页 |
| ·热激蛋白70 的同系物(HSP70h) | 第12-14页 |
| ·CP 和CPd | 第14页 |
| ·复制所需的蛋白 | 第14-15页 |
| ·疏水性蛋白 | 第15-16页 |
| ·抗病毒转基因植株的获得 | 第16-23页 |
| ·利用病毒来源的基因获得抗病植株 | 第16-19页 |
| ·外壳蛋白介导的保护作用 | 第16-17页 |
| ·复制酶介导的保护作用 | 第17-18页 |
| ·利用病毒运动蛋白基因介导病毒抗性 | 第18页 |
| ·利用病毒反义链 RNA 介导病毒抗性 | 第18-19页 |
| ·利用病毒卫星 RNA 介导病毒抗性 | 第19页 |
| ·利用RNA 干扰获得抗病植株 | 第19-23页 |
| ·RNAi 的机制 | 第19-20页 |
| ·植物与病毒相互作用的机制 | 第20-22页 |
| ·RNAi 在植物抗病毒育种中的应用进展 | 第22-23页 |
| ·本研究的立题依据 | 第23-25页 |
| ·目的意义 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与试剂 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·仪器与设备 | 第25-26页 |
| 3 方法 | 第26-35页 |
| ·苎麻花叶病毒的分离 | 第26-27页 |
| ·苎麻花叶病毒的提纯 | 第26-27页 |
| ·病毒提取样的电镜观察 | 第27页 |
| ·病毒提取样的SDS-PAGE 电泳分析 | 第27页 |
| ·苎麻花叶病毒cDNA 文库的构建 | 第27-34页 |
| ·苎麻花叶病毒RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA 中寄主DNA 的去除 | 第28页 |
| ·甲醛变性琼脂凝胶电泳分析 | 第28页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第28-29页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第29-30页 |
| ·双链cDNA 加A 尾 | 第30页 |
| ·多余A 尾及小片段cDNA 的去除 | 第30-31页 |
| ·目的片段与T 载体的连接 | 第31页 |
| ·重组质粒的转化 | 第31-32页 |
| ·电转化E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的电击转化 | 第32页 |
| ·cDNA 文库的保存 | 第32页 |
| ·cDNA 文库的检验 | 第32-34页 |
| ·库容量的测定 | 第32页 |
| ·计算重组子的百分率 | 第32-33页 |
| ·重组克隆的质粒小量提取与酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·DNA 测序 | 第34页 |
| ·克隆片断分析 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-47页 |
| ·苎麻花叶病毒的提纯及分析 | 第35-36页 |
| ·病毒提纯及纯定度鉴定 | 第35页 |
| ·病毒粒子形态的电镜观察 | 第35页 |
| ·病毒外壳蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第35-36页 |
| ·cDNA 文库的构建及其分析 | 第36-39页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第37页 |
| ·连接及转化的效率 | 第37-38页 |
| ·cDNA 文库质量的检验 | 第38-39页 |
| ·库容量和重组率的计算 | 第38页 |
| ·cDNA 文库重组克隆插入片段的大小测定 | 第38-39页 |
| ·测序结果的分析 | 第39-47页 |
| ·B09 序列测序结果及分析 | 第39-42页 |
| ·G05 序列测序结果及分析 | 第42-45页 |
| ·苎麻花叶病毒进化树分析 | 第45-47页 |
| 5 讨论 | 第47-51页 |
| ·关于苎麻花叶病毒的提纯问题 | 第47页 |
| ·DNA 文库构建的策略与载体的选择 | 第47-49页 |
| ·苎麻花叶病毒分类地位的初步研究 | 第49-51页 |
| 6 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 缩略词（Abbreviation） | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
