| 缩略语表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-82页 |
| 第一节 精子发生及其调节 | 第19-35页 |
| 1 睾丸的形态、结构和功能 | 第19-21页 |
| ·睾丸的形态与结构 | 第19页 |
| ·睾丸的功能 | 第19-20页 |
| ·曲细精管的组织结构 | 第20-21页 |
| 2 精子发生过程 | 第21-24页 |
| ·广义的精子发生过程 | 第21页 |
| ·狭义的精子发生过程 | 第21-23页 |
| ·生精周期 | 第23-24页 |
| 3 精子发生过程中生精细胞的凋亡 | 第24-28页 |
| ·生精细胞的生理性凋亡 | 第24页 |
| ·导致生精细胞凋亡的因素 | 第24-25页 |
| ·生精细胞凋亡的调节蛋白与通路 | 第25-28页 |
| 4 精子形成过程及基因表达调控 | 第28-31页 |
| ·精子头部和顶体的形成 | 第28页 |
| ·精子形成过程中细胞骨架蛋白的表达与装配 | 第28页 |
| ·染色质凝聚和核浓缩中的分子事件 | 第28-29页 |
| ·领及其作用 | 第29页 |
| ·线粒体鞘的形成 | 第29-30页 |
| ·精子形成过程中的基因表达调控 | 第30-31页 |
| 5 精子发生的调节 | 第31-35页 |
| ·精子发生的内分泌调节 | 第31-32页 |
| ·精子发生的旁分泌和自分泌调节 | 第32-34页 |
| ·其它因素对精子发生的调节 | 第34-35页 |
| 第二节 精原干细胞移植研究进展 | 第35-49页 |
| 1 精原干细胞的起源和一般生物学特征 | 第35-37页 |
| ·SSCs 与精子发生 | 第35页 |
| ·SSCs 的起源 | 第35-36页 |
| ·SSCs 的一般生物学特征 | 第36-37页 |
| 2 精原干细胞移植研究简史 | 第37-40页 |
| ·早期的研究报道:SSCs 同种移植 | 第37-38页 |
| ·SSCs 异种/源移植 | 第38-39页 |
| ·牛、羊、猴和人的睾丸注射 | 第39-40页 |
| ·SSCs 冷冻保存后的移植 | 第40页 |
| ·体外培养的SSCs 移植 | 第40页 |
| 3 精原干细胞移植技术 | 第40-45页 |
| ·SSC 移植供体和受体动物的选择 | 第40-41页 |
| ·SSC 移植方法 | 第41-43页 |
| ·SSC 移植分析 | 第43页 |
| ·受体睾丸中SSCs 克隆的形成过程 | 第43页 |
| ·影响SSCs 移植效率的因素 | 第43-45页 |
| 4 精原干细胞移植技术的应用 | 第45-49页 |
| ·物种保护和男性育性恢复 | 第45页 |
| ·SSCs 体外培养的功能性评价系统 | 第45-46页 |
| ·SSCs 的分离与鉴定 | 第46页 |
| ·不育及基因敲除研究 | 第46页 |
| ·精子发生机理研究 | 第46-47页 |
| ·遗传病的基因治疗 | 第47页 |
| ·用SSC 移植技术制作转基因动物 | 第47-49页 |
| 第三节 精原干细胞体外培养的历史和现状 | 第49-58页 |
| 1 精原干细胞体外培养简史 | 第49-50页 |
| ·SSCs 体外培养的早期尝试 | 第49页 |
| ·小鼠SSCs 的培养 | 第49-50页 |
| ·大鼠SSCs 的培养 | 第50页 |
| ·其它哺乳动物SSCs 的培养 | 第50页 |
| 2 体外培养的精原干细胞的特征 | 第50-51页 |
| ·体外培养的SSCs 的形态特征 | 第50-51页 |
| ·SSCs 的生化和组化特征 | 第51页 |
| 3 SSCs 的分离与纯化 | 第51-52页 |
| 4 影响SSCs 体外增殖的因素 | 第52-54页 |
| ·基本培养基和添加剂 | 第52页 |
| ·血清 | 第52页 |
| ·激素和维生素 | 第52页 |
| ·生长因子 | 第52页 |
| ·饲养层细胞和培养温度 | 第52-53页 |
| ·动物种类和品系 | 第53-54页 |
| 5 已建立的SSCs 长期培养体系 | 第54-55页 |
| ·Kubota’s 小鼠和大鼠SSCs 培养体系 | 第54页 |
| ·Shinohara’s 小鼠 SSCs 培养体系 | 第54-55页 |
| ·Hamra’s 大鼠SSCs 培养体系 | 第55页 |
| 6 培养的SSCs 的活性与功能鉴定方法 | 第55-56页 |
| ·SSC 移植分析 | 第55页 |
| ·精原干细胞指标 | 第55-56页 |
| ·SSCs 标志分子检测法 | 第56页 |
| 7 精原干细胞自我复制的维持机制 | 第56-58页 |
| ·GDNF 信号通路 | 第56页 |
| ·bFGF 通路 | 第56页 |
| ·Oct4 信号通路 | 第56页 |
| ·其它因子和通路 | 第56-58页 |
| 第四节 GDNF 对睾丸功能的调节 | 第58-82页 |
| 1 GDNF 家族配体 | 第58页 |
| 2 GDNF 的特性及分子结构 | 第58页 |
| 3 GDNF 受体 | 第58-59页 |
| 4 GDNF 对睾丸功能的调节 | 第59-61页 |
| ·GDNF 及其受体在睾丸中的表达状况 | 第59页 |
| ·GDNF 与精子发生 | 第59-61页 |
| ·GDNF 与睾丸发育 | 第61页 |
| ·GDNF 调节血睾屏障的形成和功能 | 第61页 |
| 5 GDNF 信号通路 | 第61-64页 |
| ·依赖RET 的GDNF 通路 | 第61-63页 |
| ·不依赖RET 的GDNF 通路 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-82页 |
| 第二章 研究论文 | 第82-155页 |
| 第一节 小鼠精原干细胞移植和后代鼠的产生 | 第82-99页 |
| 中文摘要 | 第82页 |
| ABSTRACT | 第82-83页 |
| 1 引言 | 第83-85页 |
| 2 实验材料和实验方法 | 第85-90页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·实验动物 | 第85页 |
| ·主要试剂 | 第85-86页 |
| ·重要溶液的配制 | 第86-87页 |
| ·操作针的制备 | 第87页 |
| ·培养瓶的明胶包被 | 第87页 |
| ·乳鼠睾丸细胞的分离 | 第87-88页 |
| ·SSCs 的差异贴壁分选 | 第88页 |
| ·移植受体小鼠的准备 | 第88-89页 |
| ·睾丸细胞的移植 | 第89页 |
| ·移植分析 | 第89页 |
| ·免疫细胞化学分析 | 第89-90页 |
| 3 结果与结论 | 第90-91页 |
| ·不含胰酶的消化液消化睾丸组织提高了睾丸细胞的活力 | 第90页 |
| ·差异贴壁分选方法是富集SSCs 的简单途径 | 第90页 |
| ·差异贴壁分选出的SSCs 维持干细胞活性 | 第90-91页 |
| ·来源于供体细胞的后代小鼠的产生 | 第91页 |
| 4 讨论 | 第91-96页 |
| 参考文献 | 第96-99页 |
| 第二节 小鼠精原干细胞体外培养的研究 | 第99-132页 |
| 中文摘要 | 第99页 |
| ABSTRACT | 第99-100页 |
| 1 引言 | 第100-102页 |
| 2 实验材料和研究方法 | 第102-115页 |
| ·主要仪器 | 第102页 |
| ·主要药品和试剂 | 第102-103页 |
| ·实验动物 | 第103页 |
| ·培养基和培养条件 | 第103-106页 |
| ·小鼠睾丸细胞的分离和收集 | 第106-107页 |
| ·SSCs 的差异贴壁分选和培养 | 第107页 |
| ·SSCs 标志基因表达的RT-PCR 分析 | 第107-110页 |
| ·培养细胞的免疫细胞化学分析 | 第110-111页 |
| ·流式细胞分析 | 第111页 |
| ·溶液配制 | 第111-115页 |
| 3 结果与结论 | 第115-126页 |
| ·SSCs 分离和富集方法的改良有助于睾丸体细胞的去除 | 第115-116页 |
| ·睾丸细胞的差异贴壁分选富集了SSCs | 第116-117页 |
| ·Ms 支持SSCs 的体外增殖 | 第117-122页 |
| ·培养的来自KM 小鼠的SSCs 的形态特征 | 第122-123页 |
| ·SSCs 标志分子的检测 | 第123页 |
| ·Oct4/Sox2 转录调控复合物可能在SSC 自我复制中起作用 | 第123-125页 |
| ·SSCs 的体外增殖不需要LIF | 第125-126页 |
| 4 讨论 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-132页 |
| 第三节 GDNF 对支持细胞的作用及其分子机制的研究 | 第132-155页 |
| 中文摘要 | 第132页 |
| ABSTRACT | 第132-133页 |
| 1 引言 | 第133-134页 |
| 2 研究材料和研究方法 | 第134-140页 |
| ·主要仪器 | 第134-135页 |
| ·试剂和实验动物 | 第135页 |
| ·支持细胞分离、纯化和培养 | 第135-137页 |
| ·MTT 活体染色法评定支持细胞活力 | 第137页 |
| ·支持细胞增殖检测 | 第137-138页 |
| ·免疫细胞化学分析 | 第138-139页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第139-140页 |
| ·统计分析 | 第140页 |
| 3 结果与结论 | 第140-142页 |
| ·小鼠未成熟支持细胞的纯度和形态特征 | 第140-141页 |
| ·支持细胞中的GDNF 表达状况和激素调控 | 第141页 |
| ·GDNF 促进支持细胞在体外的存活和增殖 | 第141页 |
| ·GDNF 通过GFRα1/NCAM 通路促进支持细胞增殖 | 第141-142页 |
| 4 讨论 | 第142-151页 |
| 参考文献 | 第151-155页 |
| 发表和投送的文章 | 第155-156页 |
| 致谢 | 第156页 |
