| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1 黄喉拟水龟简介 | 第13页 |
| 2 龟防病机制 | 第13-14页 |
| ·非特异性免疫 | 第13页 |
| ·特异性免疫 | 第13-14页 |
| ·免疫器官免疫 | 第13-14页 |
| ·细胞免疫 | 第14页 |
| ·影响免疫应答的因素 | 第14页 |
| 3 粘质沙雷氏菌 | 第14-15页 |
| 4 转铁蛋白研究进展 | 第15-17页 |
| ·转铁蛋白的分类 | 第15页 |
| ·转铁蛋白的结构及功能 | 第15-16页 |
| ·转铁蛋白的结构 | 第15页 |
| ·转铁蛋白的功能 | 第15-16页 |
| ·转铁蛋白的研究进展 | 第16-17页 |
| 5 技术路线 | 第17-20页 |
| 第二章 黄喉拟水龟转铁蛋白基因的克隆以及表达特征分析 | 第20-35页 |
| 1 材料与方法 | 第20-24页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·试验用龟 | 第20页 |
| ·克隆质粒和菌株 | 第20页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第20页 |
| ·其它试剂 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·基因组DNA 和总RNA 的提取及反转录 | 第21页 |
| ·基因组DNA 全长序列的克隆 | 第21-23页 |
| ·序列分析 | 第23-24页 |
| ·表达研究 | 第24页 |
| ·统计学分析 | 第24页 |
| 2 结果 | 第24-33页 |
| ·黄喉拟水龟 Tf 基因序列分析 | 第24-27页 |
| ·Tf 基因cDNA 序列分析 | 第24-25页 |
| ·Tf 基因组DNA 序列分析 | 第25-27页 |
| ·黄喉拟水龟Tf 结构分析 | 第27-29页 |
| ·黄喉拟水龟Tf 基因组织表达特征研究 | 第29-33页 |
| ·目的基因和内参基因标准曲线 | 第29-30页 |
| ·内参基因和目的基因的扩增曲线 | 第30-31页 |
| ·内参基因和目标基因的溶解曲线 | 第31页 |
| ·健康黄喉拟水龟 Tf 基因组织表达特征 | 第31-32页 |
| ·黄喉拟水龟感染细菌后 Tf 基因组织表达特征 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| ·转铁蛋白基因分子特征 | 第33-34页 |
| ·转铁蛋白基因组织表达特征 | 第34-35页 |
| 第三章 黄喉拟水龟转铁蛋白原核表达、纯化、重组蛋白抗菌活性检测及转铁蛋白体内表达分析 | 第35-55页 |
| 1 材料和方法 | 第35-45页 |
| ·实验材料 | 第35-38页 |
| ·实验用龟 | 第35页 |
| ·引物设计与合成 | 第35页 |
| ·菌种、质粒及主要试剂 | 第35页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第35-38页 |
| ·实验方法 | 第38-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第38页 |
| ·黄喉拟水龟转铁蛋白成熟肽序列的 PCR 改造扩增 | 第38-39页 |
| ·重组溶菌酶原核表达载体的构建 | 第39-42页 |
| ·重组工程菌的诱导表达 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第42-43页 |
| ·菌体超声波破碎和产物检测 | 第43页 |
| ·表达产物的初步纯化 | 第43页 |
| ·重组蛋白纯化和复性及蛋浓度检测 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白表达产物的 Western blot 鉴定 | 第44页 |
| ·免疫杂交与显色 | 第44-45页 |
| ·黄喉拟水龟 Tf 重组蛋白体外活性的检测 | 第45页 |
| ·黄喉拟水龟 Tf 体内表达分析 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-52页 |
| ·黄喉拟水龟Tf 原核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·重组菌的表达 | 第46-50页 |
| ·表达产物的纯化复性 | 第50页 |
| ·重组蛋白表达产物的 Western blot 鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组MaTf 蛋白的抑菌活性检测 | 第51页 |
| ·黄喉拟水龟Tf 体内表达分析 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·原核表达及蛋白纯化 | 第52-53页 |
| ·Tf 的抗菌性 | 第53页 |
| ·Tf 在黄喉拟水龟体内的表达特征 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 1 黄喉拟水龟转铁蛋白基因组的克隆 | 第55页 |
| 2 荧光定量PCR 方法分析转铁蛋白基因在黄喉拟水龟各组织中的表达 | 第55页 |
| 3 黄喉拟水龟转铁蛋白基因的原核表达、抗菌性检测及其在体内的表达特征 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 A 实验所用引物序列及作用 | 第62-64页 |
| 附录 B 主要仪器设备 | 第64-65页 |
| 附录 C 试剂及缓冲液的配置 | 第65-67页 |
| 附录 D 缩略语表 | 第67-69页 |
| 附录 E PET-32A 载体图 | 第69-70页 |
| 已完成文章 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
