| 郑重声明 | 第1-4页 |
| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 前言 | 第13页 |
| 一、稀有鮈鲫的生物学特征及研究现状 | 第13-16页 |
| (一) 稀有鮈鲫的生物学特点 | 第14-15页 |
| 1.生活习性、形态特征及对环境的适应性 | 第14页 |
| 2.繁殖及胚胎发育特点 | 第14-15页 |
| (二) 研究近况 | 第15-16页 |
| 二、性别的形成与分化 | 第16-17页 |
| (一) 人类的性别发生 | 第16页 |
| (二) 昆虫的性腺发生 | 第16-17页 |
| (三) 爬行类动物的性腺发生 | 第17页 |
| 三.性别决定与性别分化的机制 | 第17-25页 |
| (一) 性别决定与性别分化的方式 | 第17-18页 |
| (1) 果蝇和线虫的性别决定和分化 | 第17-18页 |
| (2) 鸟类等的性别决定和分化 | 第18页 |
| (3) 蜜蜂和蚂蚁的性别决定和分化 | 第18页 |
| (二) 性别决定的分子机理 | 第18-23页 |
| (1) H-Y抗原性别决定假说 | 第19-20页 |
| (2) Bkm序列性别决定假说 | 第20页 |
| (3) ZFY基因性别决定假说 | 第20页 |
| (4) SRY／Sry基因性别决定假说 | 第20-21页 |
| (5) 参与性别决定调控的其它基因家族 | 第21-23页 |
| 1.早期发育基因 | 第21页 |
| 2.DMRT基因家族 | 第21-22页 |
| 3.HOX基因家族 | 第22-23页 |
| (三) 鱼类的性别决定和性别分化的研究进展与方法 | 第23-25页 |
| 1.性连锁的表型特征 | 第23页 |
| 2.通过人为诱导的性逆转 | 第23-24页 |
| 3.鱼类的单性发育 | 第24页 |
| 4.染色体核型分析和显带分析 | 第24页 |
| 5.二价体和减数分裂联会复合体的观察 | 第24-25页 |
| 6.蛋白质标记 | 第25页 |
| 7.比较基因组杂交分析 | 第25页 |
| 四.生物信息学在生物学上的应用及研究进展 | 第25-29页 |
| (一).生物信息学的主要研究方法 | 第26-27页 |
| 1、序列比对(Alignment) | 第26页 |
| 2、结构比对 | 第26页 |
| 3、蛋白质结构预测，包括2级和3级结构预测 | 第26页 |
| 4、计算机辅助基因识别(仅指蛋白质编码基因) | 第26页 |
| 5、非编码区分析和DNA语言研究 | 第26页 |
| 6、分子进化和比较基因组学 | 第26-27页 |
| 7、序列重叠群(Contigs)装配 | 第27页 |
| (二) 当前主要研究内容有以下几个方面 | 第27-29页 |
| 1.获取人和各种生物的完整基因组 | 第27页 |
| 2.发现新基因和新的单核苷酸多态性 | 第27-28页 |
| a) 基因的电脑克隆 | 第27页 |
| b) 从基因组DNA序列中预测新基因 | 第27-28页 |
| c) 发现单核苷酸多态(SNP) | 第28页 |
| 3.基因组中非编码蛋白质 | 第28页 |
| 4.在基因组水平研究生物进化 | 第28页 |
| 5.完整基因组的比较研究 | 第28-29页 |
| 6.从功能基因组到系统生物学 | 第29页 |
| 7.蛋白质结构模拟与药物设计 | 第29页 |
| 五.本研究的目的和意义 | 第29-71页 |
| 材料和方法 | 第31-46页 |
| 一、实验材料 | 第31-35页 |
| (一) 实验动物 | 第31页 |
| (二) 主要试剂及来源 | 第31页 |
| (三) 引物 | 第31-32页 |
| (四) 本实验使用的溶液及配方 | 第32-34页 |
| (五) 本实验所用的专业分析软件及数据库 | 第34-35页 |
| 二、实验方法 | 第35-46页 |
| 1.实验动物饲养和繁殖 | 第35-36页 |
| a) 一般饲养管理 | 第35页 |
| b) 繁殖 | 第35-36页 |
| c) 胚胎发育及鱼苗饲养 | 第36页 |
| 2.有丝分裂细胞中期染色体的制备 | 第36-37页 |
| ·肾细胞直接制片 | 第36-37页 |
| ·混合胚胎细胞染色体制片 | 第37页 |
| ·单个胚胎染色体制片 | 第37页 |
| ·尾鳍细胞培养法制片 | 第37页 |
| a) 尾鳍细胞培养 | 第37页 |
| b) 制片 | 第37页 |
| 3.精巢减数分裂细胞二价体的制备 | 第37-38页 |
| 4.核型分析 | 第38页 |
| 5.基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·从组织中提取基因组DNA | 第38页 |
| ·从血液中提取基因组DNA | 第38页 |
| 6.Sox基因兼并引物对稀有鮈鲫基因组DNA的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 7.PCR产物的回收与纯化 | 第39页 |
| 8.PCR产物的连接和克隆 | 第39页 |
| ·PCR产物与载体连接 | 第39页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第39页 |
| 9.Sox基因片段克隆、质粒提取和菌落PCR分析 | 第39-40页 |
| 10.Sox基因片段的SSCP筛选和测序 | 第40页 |
| 11.稀有鮈鲫Sox基因的序列分析 | 第40页 |
| 12.Sox基因家族的聚类分析 | 第40页 |
| 13.稀有鮈鲫基因组DNA的超声波处理 | 第40页 |
| 14.DNA片断的生物素标记 | 第40-41页 |
| ·随机引物法标记 | 第40-41页 |
| ·PCR法标记探针 | 第41页 |
| 15.标记效率检测 | 第41-42页 |
| ·DAB显色检测探针标记效率 | 第41页 |
| ·生物素标记检测 | 第41-42页 |
| 16.稀有鮈鲫基因组DNA与人Sry基因点杂交 | 第42页 |
| 17.Hox基因兼并引物PCR扩增稀有鮈鲫基因组DNA | 第42页 |
| 18.RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)技术筛选雌雄差异性基因 | 第42页 |
| 19.C语言编程使用源代码 | 第42-46页 |
| 结果 | 第46-66页 |
| 一.稀有鮈鲫雌雄外形区别及性腺解剖 | 第46-47页 |
| 二.稀有鮈鲫产卵情况统计 | 第47页 |
| 三.胚胎发育的观察 | 第47-49页 |
| 四.稀有鮈鲫的核型 | 第49-51页 |
| 五.二价染色体的观察 | 第51-53页 |
| 六.基因组DNA提取 | 第53页 |
| 七.点杂交初步验证Sox基因 | 第53-54页 |
| 八.PCR扩增稀有鮈鲫Sox基因结果 | 第54页 |
| 九.克隆检测，SSCP筛选 | 第54-55页 |
| 十.稀有鮈鲫Sox基因的序列分析 | 第55-56页 |
| 十一 稀有鮈鲫Sox基因的同源性分析 | 第56-57页 |
| 十二.进化程度不同的物种Sox基因家族的聚类分析 | 第57-62页 |
| 十三.稀有鮈鲫Sox1和Sox21基因与部分动物Sox基因的同源性比较结果 | 第62-63页 |
| 十四.Hox基因的扩增 | 第63-64页 |
| 十五.RAPD扩增结果分析 | 第64-65页 |
| 十六.生物素标记探针的效率检测 | 第65-66页 |
| 讨论 | 第66-71页 |
| 一.稀有鮈鲫作为实验模式动物的讨论 | 第66页 |
| 二.鱼类性染色体的进化 | 第66-68页 |
| 1.Sox基因的保守性分析 | 第66-67页 |
| 2.显带技术和二价体对于性染色体进化的分析 | 第67-68页 |
| 三.信息学在生物学研究中的应用、意义和展望 | 第68-71页 |
| 1.利用DNA序列构建聚类树 | 第68页 |
| 2.数据库资源利用 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 在读期间发表论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
