| 第一部分 文献综述 | 第1-37页 |
| 第一章 细胞因子研究概况 | 第13-19页 |
| ·细胞因子的研究进展 | 第13-19页 |
| ·细胞因子的转录调控 | 第14-16页 |
| ·细胞因子作用特点 | 第16-17页 |
| ·白细胞介素研究进展 | 第17-19页 |
| 第二章 IL-4 和 IL-6 研究概况 | 第19-31页 |
| ·IL-4 的研究进展 | 第19-23页 |
| ·IL-4 的产生 | 第19页 |
| ·IL-4 结构特点及与功能关系 | 第19-20页 |
| ·IL-4 受体研究进展 | 第20-21页 |
| ·IL-4 的生物学功能 | 第21-22页 |
| ·IL-4 与疾病关系 | 第22-23页 |
| ·IL-6 研究进展 | 第23-31页 |
| ·IL-6 的结构特点和功能关系 | 第24-26页 |
| ·IL-6 的受体的研究 | 第26页 |
| ·IL-6R 介导的信号转导 | 第26-27页 |
| ·IL-6 的生物学功能 | 第27-28页 |
| ·IL-6 与疾病关系 | 第28-31页 |
| 第三章 细胞因子免疫佐剂效应的研究 | 第31-37页 |
| ·免疫增强剂的发展简史 | 第31-32页 |
| ·细胞因子类基因佐剂的优越性 | 第32页 |
| ·细胞因子类基因佐剂的作用机制 | 第32-33页 |
| ·细胞因子作为佐剂的应用原则 | 第33-34页 |
| ·IL-4 的免疫佐剂效应 | 第34-35页 |
| ·IL-6 的免疫佐剂效应 | 第35-36页 |
| ·结语 | 第36-37页 |
| 第二部分 猪 IL-4 和 IL-6 基因的克隆 | 第37-55页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·实验动物、菌种和载体 | 第37页 |
| ·酶和试剂 | 第37-38页 |
| ·引物 | 第38页 |
| ·IL-6 克隆引物 | 第38页 |
| ·IL-4 克隆引物 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·溶液 | 第38-39页 |
| ·仪器与设备 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·pIL-6 基因的克隆 | 第39-44页 |
| ·猪脾细胞和淋巴细胞的分离与培养 | 第39页 |
| ·淋巴细胞的刺激诱导 | 第39-40页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第40页 |
| ·RT-PCR 扩增目的片段 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第41页 |
| ·目的基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第42-44页 |
| ·pIL-4 基因的克隆 | 第44页 |
| ·猪脾淋巴细胞的分离与培养 | 第44页 |
| ·淋巴细胞的刺激诱导 | 第44页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第44页 |
| ·RT-PCR 扩增目的片段 | 第44页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第44页 |
| ·目的基因的克隆 | 第44页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-52页 |
| ·pIL-6 基因的克隆 | 第44-48页 |
| ·淋巴细胞的体外刺激活化 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR 扩增pIL-6 cDNA 结果 | 第45页 |
| ·重组质粒的酶切及 PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·序列分析与同源性比较 | 第45-48页 |
| ·pIL-4 基因的克隆 | 第48-52页 |
| ·淋巴细胞的体外刺激活化 | 第48页 |
| ·RT-PCR 扩增pIL-4 cDNA 结果 | 第48页 |
| ·重组质粒的酶切及 PCR 鉴定 | 第48页 |
| ·序列分析与同源性比较 | 第48-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第三部分 重组猪 IL-6 的原核表达与活性分析 | 第55-69页 |
| ·实验材料 | 第55-57页 |
| ·实验动物、菌种和载体 | 第55页 |
| ·酶和试剂 | 第55页 |
| ·引物 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·溶液 | 第56页 |
| ·仪器与设备 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-63页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·目的片段的扩增 | 第57页 |
| ·目的片段与pGEX-4T-1载体的酶切回收 | 第57-58页 |
| ·目的片段与表达载体的连接转化 | 第58页 |
| ·重组表达质粒的提取与鉴定 | 第58页 |
| ·以 RT-PCR检测重组子在诱导条件下的转录情况 | 第58-59页 |
| ·重组菌的小量诱导表达 | 第59页 |
| ·高温诱导 | 第59页 |
| ·低温诱导 | 第59页 |
| ·表达产物鉴定分析 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第59-60页 |
| ·蛋白含量的初步测定 | 第60页 |
| ·大量诱导表达重组 IL-6 蛋白 | 第60-62页 |
| ·高温诱导 | 第60-61页 |
| ·低温诱导 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白的活性分析 | 第62-63页 |
| ·IL-6 重组蛋白的剂量和毒性试验 | 第62页 |
| ·IL-6 可溶性蛋白的活性检测(MTT 法) | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-67页 |
| ·表达引物 PCR 扩增产物 | 第63-64页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第64页 |
| ·RT-PCR 检测转录情况 | 第64页 |
| ·重组菌的小量诱导表达 | 第64-66页 |
| ·高温诱导结果 | 第64-65页 |
| ·低温诱导结果 | 第65-66页 |
| ·重组菌的大量诱导表达 | 第66页 |
| ·纯化蛋白的检测 | 第66-67页 |
| ·IL-6 重组蛋白对小鼠毒性检测结果 | 第66页 |
| ·IL-6 重组蛋白对小鼠脾淋巴细胞生物学活性检测结果 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第四部分 pIL-6 真核表达载体的构建及其疫苗佐剂效应 | 第69-78页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·实验动物、菌种和载体 | 第69页 |
| ·酶和试剂 | 第69页 |
| ·引物 | 第69-70页 |
| ·培养基及溶液 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-73页 |
| ·猪IL-6 真核表达载体pcDNA3.1 的构建、转化及鉴定 | 第70页 |
| ·重组真核表达载体pcDNA3.1 质粒提取及纯化 | 第70-71页 |
| ·质粒的大量提取 | 第70-71页 |
| ·质粒 DNA 的纯化 | 第71页 |
| ·猪囊尾蚴全虫抗原的制备 | 第71页 |
| ·动物免疫 | 第71-72页 |
| ·抗体水平检测 | 第72页 |
| ·IL-4 的检测 | 第72-73页 |
| ·结果 | 第73-75页 |
| ·猪 IL-6 真核表达载体pcDNA3.1 的构建 | 第73页 |
| ·重组真核表达载体pcDNA3.1 质粒提取及纯化 | 第73页 |
| ·猪囊尾蚴全虫抗原的制备 | 第73页 |
| ·动物免疫抗体测定结果 | 第73-74页 |
| ·IL-4 的检测 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 附图 | 第89-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
