聚乙二醇衍生物的合成及其几种修饰酶性能的研究
| 第一章 文献综述 | 第1-13页 |
| ·蛋白质(酶)化学修饰概述 | 第6-7页 |
| ·蛋白质(酶)的聚乙二醇化学修饰 | 第7-12页 |
| ·蛋白质(酶)的PEG化概述 | 第7-8页 |
| ·第一代蛋白质(酶)的PEG化 | 第8-10页 |
| ·第二代蛋白质(酶)的PEG化 | 第10-12页 |
| ·本文研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 实验原理和方法 | 第13-16页 |
| ·蛋白质(酶)化学修饰原理 | 第13页 |
| ·N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯化率测定方法 | 第13-14页 |
| ·凝胶层析分离纯化目标产物的检测方法 | 第14-15页 |
| ·羧基的检测方法 | 第14页 |
| ·PEG的检测方法 | 第14-15页 |
| ·酶反应动力学参数米氏常数(Km)的测定方法 | 第15-16页 |
| 第三章 实验部分 | 第16-30页 |
| ·实验试剂与器材 | 第16-18页 |
| ·实验药品与试剂 | 第16-18页 |
| ·实验器材 | 第18页 |
| ·聚乙二醇修饰剂的合成 | 第18-24页 |
| ·MPEG5000-SS的制备 | 第18-19页 |
| ·两种方法制备MPEG5000的NHS活性酯 | 第19-21页 |
| ·两种方法制备2MPEG5000-Lys | 第21-24页 |
| ·聚乙二醇修饰剂对酶的修饰及表征 | 第24-25页 |
| ·聚乙二醇(PEG)的修饰反应 | 第24页 |
| ·修饰酶的纯化 | 第24页 |
| ·酶浓度的测定 | 第24-25页 |
| ·修饰酶修饰化度的测定 | 第25页 |
| ·胰蛋白酶酶学性质的测定 | 第25-27页 |
| ·胰蛋白酶酶活的测定 | 第25-26页 |
| ·胰蛋白酶修饰前后热稳定性变化的测定 | 第26页 |
| ·胰蛋白酶修饰前后自水解速率测定 | 第26-27页 |
| ·胆固醇酯酶酶学性质的测定 | 第27-30页 |
| ·胆固醇酯酶(CEase)活力测定 | 第28页 |
| ·修饰前后胆固醇酯酶(CEase)热稳定性的测定 | 第28-30页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第30-44页 |
| ·PEG修饰剂合成方案的选择 | 第30-32页 |
| ·单链PEG修饰剂合成方法的选择 | 第30页 |
| ·双链MPEG修饰剂合成方法的选择及结果分析 | 第30-32页 |
| ·PEG修饰剂合成结果分析 | 第32-33页 |
| ·PEG修饰剂红外谱图分析 | 第33页 |
| ·胰蛋白酶PEG修饰结果 | 第33-38页 |
| ·胰蛋白酶PEG修饰修饰度测定结果 | 第33-34页 |
| ·胰蛋白酶PEG修饰前后酶活力变化 | 第34-35页 |
| ·胰蛋白酶PEG修饰前后热稳定性的变化 | 第35-36页 |
| ·胰蛋白酶PEG修饰前后自水解速率的变化 | 第36-37页 |
| ·胰蛋白酶PEG修饰前后Km值的变化 | 第37-38页 |
| ·胆固醇酯酶PEG修饰结果 | 第38-44页 |
| ·胆固醇酯酶PEG修饰修饰度测定结果 | 第38-39页 |
| ·胆固醇酯酶PEG修饰前后酶活力的变化 | 第39-41页 |
| ·胆固醇酯酶PEG修饰前后热稳定性的变化 | 第41页 |
| ·胆固醇酯酶PEG修饰前后Km值的变化 | 第41-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 实验所需部分试剂的配制 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50-53页 |
