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水稻条纹病毒(RSV)单克隆抗体的制备及检测应用

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-9页
第一章 水稻条纹病毒研究进展第9-19页
   ·病毒粒子形态及传毒介体第9-10页
   ·病毒的理化特性第10-11页
     ·物理特性第10页
     ·化学特性第10-11页
   ·病毒分类地位第11页
   ·病毒的基因组结构、功能及表达策略第11-16页
     ·基因组末端保守序列第11-12页
     ·基因组结构及功能第12-14页
       ·RdRp第13页
       ·CP、病害特异性蛋白第13-14页
       ·可能编码运动蛋白的基因片段第14页
     ·病毒的复制与转录机制第14-16页
   ·RSV的基因工程第16页
   ·RSV进化上的亲缘关系第16-18页
   ·RSV病害控制策略第18-19页
第二章 单克隆抗体技术及其在植物病毒中的应用第19-38页
 1 单克隆抗体技术概述第20-30页
   ·抗体的基本结构第20-21页
   ·杂交瘤技术的基本原理第21-23页
   ·杂交瘤技术的基本流程第23-25页
     ·动物免疫第23-24页
     ·细胞融合第24页
     ·杂交瘤细胞的筛选第24-25页
     ·杂交瘤细胞的克隆第25页
     ·单克隆抗体的制备第25页
     ·杂交瘤细胞的冻存第25页
   ·单克隆抗体和多克隆抗体的比较第25-26页
   ·单克隆抗体技术的发展第26-29页
     ·杂交瘤技术的拓展第26-28页
     ·基因工程抗体的发展第28-29页
   ·单克隆抗体的基因工程第29-30页
 2 单克隆抗体在植物病毒中的应用第30-34页
   ·病害诊断和检测第30-31页
   ·病毒分类与株系鉴定第31-33页
   ·病毒蛋白抗原结构分析第33页
   ·作为探针分析病毒基因产物的功能第33-34页
 3 植物病毒学中常用的免疫检测技术第34-38页
   ·沉淀法第34-35页
   ·酶联免疫吸附测定法第35-36页
   ·免疫印迹检测第36页
   ·免疫胶体金技术第36页
   ·免疫捕获反转录PCR第36-38页
第三章 研究目的意义及技术路线第38-40页
 1 研究目的意义第38-39页
 2 研究的技术路线第39-40页
第四章 材料与方法第40-51页
 1 材料第40-44页
   ·毒源第40页
   ·灰飞虱第40页
   ·BALB/c小鼠第40页
   ·用于单克隆抗体制备的材料第40-41页
   ·常用缓冲液配方第41-43页
   ·设备与仪器第43-44页
 2 方法第44-51页
   ·植物病毒的纯化第44-45页
     ·病毒提纯第44-45页
     ·病毒粒子的电镜观察第45页
     ·提纯病毒紫外检测第45页
   ·单克隆抗体的制备及检测方法第45-48页
     ·免疫动物第45-46页
     ·细胞融合及培养第46页
     ·杂交瘤细胞的单克隆化及扩增第46页
     ·杂交瘤细胞株的保存和复苏第46-47页
     ·腹水抗体制备及纯化第47-48页
       ·腹水抗体制备第47页
       ·单抗的纯化第47-48页
     ·酶联免疫吸附分析法第48页
   ·Western blot第48-50页
     ·SDS-PAGE第48-49页
     ·电转移第49页
     ·Western blot第49-50页
   ·酶标抗体的制备及定量测定第50-51页
第五章 RSV单克隆抗体的制备及检测应用第51-62页
 1 材料与方法第51-53页
   ·病毒提纯第51页
   ·单克隆抗体的制备第51页
   ·单克隆抗体效价的测定第51-52页
   ·检测灵敏度测定第52页
   ·单克隆抗体特异性检测第52页
   ·Western blot分析第52页
   ·灰飞虱检测灵敏度的测定第52页
   ·田间灰飞虱带毒率测定第52-53页
 2 结果与分析第53-60页
   ·病毒提纯第53页
   ·病毒粒子的电镜观察第53页
   ·细胞的融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆第53-54页
   ·细胞冻存复苏及腹水抗体的制备第54-55页
   ·单克隆抗体含量测定第55页
   ·单克隆抗体的效价测定第55-56页
   ·单克隆抗体对不同植物病毒特异性测定第56页
   ·单克隆抗体对提纯病毒及病叶的检测灵敏度确定第56-57页
   ·间接ELISA方阵试验测定病叶最佳工作浓度第57-58页
   ·Western blot检测第58页
   ·灰飞虱最佳稀释度的测定第58-59页
   ·大田灰飞虱带毒率的检测第59-60页
 3 讨论第60-62页
第六章 灰飞虱体内RSV检测方法的建立第62-70页
 1 材料与方法第62-64页
   ·酶标抗体的制备第62页
   ·酶标抗体效价的测定第62页
   ·酶标抗体最佳工作浓度的测定第62-63页
   ·直接与间接ELISA的比较第63页
     ·直接ELISA第63页
     ·间接ELISA第63页
   ·直接DIBA和间接DIBA第63-64页
     ·直接DIBA第63-64页
     ·间接DIBA法第64页
 2 结果与分析第64-69页
   ·酶标抗体的制备第64页
   ·酶标抗体效价的测定第64-65页
   ·直接ELISA方阵试验确定酶标抗体最佳工作浓度第65-67页
   ·直接ELISA与间接ELISA检测结果比较第67页
   ·DIBA最适条件的建立第67-68页
     ·间接DIBA检测灰飞虱体的内RSV第67页
     ·直接DIBA检测灰飞虱体内的RSV第67-68页
   ·DIBA法检测灰飞虱体内的RSV第68页
   ·间接ELISA与直接DIBA对灰飞虱体内RSV的检测第68页
   ·应用直接DIBA法检测田间灰飞虱的带毒率第68-69页
 3 讨论第69-70页
参考文献第70-79页
致谢第79页

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