| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一部分 NF-κB在老年多器官功能不全综合症中的作用研究 | 第10-38页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 NF-κB在老化小鼠模型中活性及表达的变化 | 第13-18页 |
| ·实验材料与仪器 | 第13页 |
| ·实验方法 | 第13-14页 |
| ·石蜡切片的制作 | 第13页 |
| ·NF-κB的免疫组化分析 | 第13页 |
| ·组织匀浆 | 第13-14页 |
| ·组织蛋白浓度的测定 | 第14页 |
| ·SOD及MDA水平测定 | 第14页 |
| ·组织核蛋白(nuclear extracts)的提取 | 第14页 |
| ·凝胶阻滞分析 | 第14页 |
| ·实验结果 | 第14-17页 |
| ·小鼠脏器内的氧化水平 | 第14-15页 |
| ·NF-κB的免疫组化分析结果 | 第15-16页 |
| ·小鼠脏器核提取物的EMSA结果 | 第16-17页 |
| ·讨论 | 第17-18页 |
| 第二章 老化小鼠模型脏器的蛋白质组学分析 | 第18-30页 |
| ·实验材料与仪器 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-21页 |
| ·组织蛋白的提取 | 第18页 |
| ·组织蛋白双向电泳 | 第18-20页 |
| ·考玛斯亮蓝染色 | 第20页 |
| ·双向电泳结果处理 | 第20页 |
| ·从PAGE胶中酶切和提取差异蛋白 | 第20-21页 |
| ·差异蛋白的肽质量指纹谱分析 | 第21页 |
| ·数据库检索初步鉴定蛋白质 | 第21页 |
| ·实验结果 | 第21-28页 |
| ·小鼠脏器组织蛋白的提取及定量 | 第21-22页 |
| ·2D电泳结果 | 第22-23页 |
| ·2D电泳图象分析 | 第23-25页 |
| ·差异蛋白的肽质量指纹谱分析 | 第25页 |
| ·数据库检索鉴定差异蛋白质 | 第25-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 NF-κB在多器官功能不全小鼠实验模型中的活性变化 | 第30-36页 |
| ·实验材料与试剂 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30页 |
| ·酵母多糖诱发小鼠MODS模型的制备 | 第30页 |
| ·酵母多糖注射后小鼠的生理学观察 | 第30页 |
| ·酵母多糖注射后小鼠的病理学观察 | 第30页 |
| ·小鼠脏器核蛋白的EMSA分析 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-34页 |
| ·腹腔注射酵母多糖后小鼠的生理及病理学上改变 | 第30-33页 |
| ·MODS小鼠脏器核提取物的EMSA结果 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第一部分 小结 | 第36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第二部分 A20、E1A基因转导抑制异种移植中DXR的研究 | 第38-69页 |
| 前言 | 第39-41页 |
| 第一章 A20基因转导抑制异种移植中猪血管内皮细胞的活化 | 第41-46页 |
| ·实验材料与仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·A20基因真核表达载体的构建及转染 | 第41-42页 |
| ·转基因细胞DNA及RNA水平上的检测 | 第42-43页 |
| ·细胞生长曲线分析 | 第43页 |
| ·流式细胞术检测转基因细胞表面E-选择素的表达 | 第43页 |
| ·转录因子NF-κB活性的检测 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-46页 |
| ·真核表达载体pcDNA3-A20的构建 | 第43-44页 |
| ·转基因细胞A20基因的DNA及RNA水平上的检测 | 第44页 |
| ·细胞的生长曲线分析 | 第44页 |
| ·A20基因转导对TNF-α处理后细胞表面粘附分子E-选择素表达的影响 | 第44-45页 |
| ·A20基因转导对NF-κB活性的影响 | 第45-46页 |
| 第二章 转E1A基因小鼠制备 | 第46-65页 |
| ·实验材料和仪器 | 第46-48页 |
| ·实验方法 | 第48-54页 |
| ·E1A转基因载体的构建及用于受精卵原核注射的转基因片段的制备 | 第48-49页 |
| ·受精卵显微注射 | 第49-51页 |
| ·小鼠尾尖基因组DNA的制备 | 第51-52页 |
| ·转基因小鼠的鉴定 | 第52-53页 |
| ·转基因小鼠F1代的培养 | 第53页 |
| ·RT-PCR检测E1A基因的表达水平 | 第53-54页 |
| ·人血清刺激基因小鼠 | 第54页 |
| ·转基因小鼠脏器细胞表面E-选择素的检测 | 第54页 |
| ·实验结果 | 第54-59页 |
| ·转E1A基因载体的构建及用于受精卵原核注射的转基因片段的制备 | 第54-55页 |
| ·受精卵的显微注射 | 第55-56页 |
| ·转基因小鼠基因组DNA的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·Southern Blot鉴定转基因小鼠 | 第57页 |
| ·F1代转基因小鼠脏器内E1A mRNA水平上的检测 | 第57-58页 |
| ·转基因小鼠血管内皮细胞表面E-选择素的检测 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-65页 |
| 第二部分 小结 | 第65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 综述 | 第71-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录1、 老化小鼠与年青小鼠肺脏差异蛋白的质谱结果 | 第85-90页 |
| 附录2、 已发表的相关论文 | 第90-104页 |
