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拟南芥COS1基因的克隆及其功能分析

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-9页
第一章 前言第9-16页
   ·拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)第9-10页
   ·茉莉素(jasnonates,JAs)的生物合成及信号传导途径第10-12页
     ·茉莉素(JAS)是一类新型的植物内源激素第10页
     ·茉莉素的生物合成第10-11页
     ·茉莉素的信号传导途径第11-12页
   ·核黄素(Riboflavin,RIB)第12-15页
     ·核黄素及其生物合成第12-13页
     ·2,4-二氧四氢蝶啶合成酶和核黄素合成酶的作用机理第13-14页
     ·核黄素与植物抗性系统第14-15页
   ·本研究的目的第15-16页
第二章 材料与方法第16-24页
   ·材料第16-17页
     ·植物材料第16页
     ·培养基第16页
     ·质粒第16页
     ·菌株第16-17页
     ·细菌人工载体(BAC)第17页
     ·抗生素第17页
     ·其他化学试剂第17页
   ·方法第17-24页
     ·拟南芥的培养及生长条件第17页
     ·突变株的筛选第17页
     ·微量DNA的提取第17-18页
     ·分子标记的设计第18-19页
     ·农杆菌感受态的制备第19页
     ·大肠杆菌和农杆菌的转化及鉴定第19页
     ·拟南芥的遗传转化及鉴定第19-20页
     ·RT-PCR第20页
     ·叶绿素含量的测定第20页
     ·Northern杂交分析第20-22页
   (1) 样品的处理第20页
   (2) RNA的提取第20-21页
   (3) 探针的DIG标记第21页
   (4) RNA甲醛变性胶电泳第21页
   (5) 转膜第21页
   (6) Northem杂交第21-22页
     ·Western杂交分析第22-23页
   (1) 总蛋白的提取第22页
   (2) SDS-PAGE电泳第22页
   (3) Western杂交第22-23页
     ·病原菌接种第23-24页
第三章 结果与分析第24-45页
   ·cos1突变株的筛选与鉴定第24-35页
     ·拟南芥cos1突变株的筛选第24-25页
     ·cos1突变株的鉴定第25-35页
   (1) cos1的表现型分析第25-26页
   (2) cos1的根对茉莉素反应的敏感性分析第26-27页
   (3) cos1的茉莉素诱导基因的表达分析第27-28页
   (4) cos1突变能组成型抑制coi1-2在植物衰老方面的缺陷第28-31页
   (5) cos1突变与植物抗性反应第31-33页
   (6) cos1表现组成型的乙烯三重效应,在乙烯信号链上处于ETR1的下游且与乙烯的另一负调控子CTR1有累加效应第33-35页
   ·cos1基因的图谱定位及克隆第35-38页
     ·cos1基因的图谱定位第35-37页
     ·重组质粒的构建第37-38页
   (1) F6E13 BAC的酶切位点分析第37页
   (2) F6E13 BAC质粒的提取第37页
   (3) 酶切、连接、转化及阳性克隆的鉴定第37-38页
   ·cos1基因的互补及功能分析第38-45页
     ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化第38页
     ·转化子的鉴定第38-39页
     ·亚克隆重组质粒的构建、拟南芥的遗传转转化及转化子的筛选第39-41页
   (1) 亚克隆重组质粒的构建第39页
   (2) 拟南芥的遗传转化及转化子的筛选第39-41页
     ·cos1基因及其功能分析第41-45页
   (1) cos1突变株的突变位点分析第41-43页
   (2) 外源核黄素能部分互补cos1突变的表现型第43页
   (3) cos1基因第43-45页
第四章 讨论第45-48页
参考文献第48-54页
缩写词表第54-55页
致谢第55-56页
作者简历第56页

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