| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 绪论 | 第17-33页 |
| 1 合成鱼腥草素有关药理作用研究概况 | 第17-18页 |
| 2 巨噬细胞有关研究文献综述 | 第18-25页 |
| ·巨噬细胞的功能及活化后的变化 | 第18-20页 |
| ·巨噬细胞产生的溶菌酶 | 第20-21页 |
| ·巨噬细胞产生的酸性磷酸酶 | 第21-22页 |
| ·活化巨噬细胞产生的反应性氧中介物 | 第22-23页 |
| ·巨噬细胞内的Ca~(2+)、CaMKⅡ、CREB、ERK 1/2及Fos等信号传导分子 | 第23-25页 |
| 3 在T细胞活化过程中发挥主要作用的两种细胞因子 | 第25-28页 |
| ·巨噬细胞产生的IL-1 | 第25-27页 |
| ·T淋巴细胞产生的IL-2 | 第27-28页 |
| 4 免疫佐剂研究概况 | 第28-33页 |
| 第一章 合成鱼腥草素对巨噬细胞功能和活化状态的影响 | 第33-54页 |
| 1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-46页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞分泌溶菌酶能力的影响实验 | 第34-37页 |
| ·含5％胎牛血清的Hank's液配制 | 第35页 |
| ·含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第35-36页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第36页 |
| ·巨噬细胞的分离 | 第36页 |
| ·溶菌法测定巨噬细胞产生的溶菌酶 | 第36-37页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的酸性磷酸酶水平的影响实验 | 第37-38页 |
| ·含5％胎牛血清的Hank's液配制 | 第37页 |
| ·含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第37页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第37页 |
| ·含有0.05M酒石酸钠的醋酸缓冲液(pH4.9)的配制 | 第37页 |
| ·碱性反应液配制 | 第37页 |
| ·巨噬细胞的分离 | 第37页 |
| ·游离酚法测定巨噬细胞产生的酸性磷酸酶 | 第37-38页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞吞噬功能的影响实验 | 第38-39页 |
| ·Alsever's血球保存液配制 | 第38页 |
| ·鸡红细胞悬液制备 | 第38页 |
| ·瑞氏染液配制 | 第38页 |
| ·观察巨噬细胞吞噬百分率 | 第38-39页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的补体C4水平的影响实验 | 第39-40页 |
| ·EAR4的制备 | 第39页 |
| ·巴比妥缓冲液配制 | 第39页 |
| ·含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第39-40页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第40页 |
| ·巨噬细胞的分离 | 第40页 |
| ·50％溶血管制备 | 第40页 |
| ·溶血法测定巨噬细胞产生的补体C4 | 第40页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞表面C3b受体表达水平的影响实验 | 第40-42页 |
| ·酵母多糖悬液制备 | 第41页 |
| ·动物分组及给药方法 | 第41页 |
| ·豚鼠血清制备 | 第41页 |
| ·含肝素的pH7.4巴比妥缓冲液制备 | 第41页 |
| ·单层巨噬细胞的获得 | 第41-42页 |
| ·ZC悬液(酵母多糖-C3b复合物悬液)的制备 | 第42页 |
| ·显微镜下观察ZC花环形成率 | 第42页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞呼吸爆发的影响实验 | 第42-44页 |
| ·Dulbecco's调整缓冲液配制 | 第42-43页 |
| ·DCFH-DA溶液配制 | 第43页 |
| ·ConA溶液配制 | 第43页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第43页 |
| ·含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第43页 |
| ·巨噬细胞的分离 | 第43页 |
| ·流式细胞术法检测巨噬细胞的呼吸爆发 | 第43-44页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞产生IL-1α及IL-1β水平的影响实验 | 第44-46页 |
| ·含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第44页 |
| ·LPS溶液配制 | 第44页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第44页 |
| ·巨噬细胞的分离 | 第44页 |
| ·ELISA法检测巨噬细胞产生的IL-1α及IL-1β | 第44-46页 |
| ·IL-1α检测程序 | 第45页 |
| ·IL-1β检测程序 | 第45-46页 |
| 3 实验结果 | 第46-53页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞分泌溶菌酶能力的影响 | 第46-47页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的酸性磷酸酶水平的影响 | 第47-48页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第48-49页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的补体C4水平的影响 | 第49-50页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞表面C3b受体表达水平的影响 | 第50-51页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞呼吸爆发的影响 | 第51-52页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的IL-1α及IL-1β水平的影响 | 第52-53页 |
| 第一章小结 | 第53-54页 |
| 第二章 合成鱼腥草素在巨噬细胞内的信号传导途径研究 | 第54-71页 |
| 1 实验材料 | 第54-56页 |
| 2 实验方法 | 第56-65页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内游离钙离子浓度的影响实验 | 第56-58页 |
| ·正常检测缓冲液配制 | 第57页 |
| ·去钙离子络合缓冲液配制 | 第57页 |
| ·2mM钙离子检测缓冲液配制 | 第57页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第57-58页 |
| ·含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第58页 |
| ·巨噬细胞的分离 | 第58页 |
| ·检测与计算巨噬细胞内游离钙离子浓度 | 第58页 |
| ·合成鱼醒草素对巨噬细胞内CaMKⅡ磷酸化程度的影响 | 第58-64页 |
| ·含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第59页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第59页 |
| ·加样缓冲液配制 | 第59-60页 |
| ·电泳缓冲液配制 | 第60页 |
| ·转移缓冲液配制 | 第60页 |
| ·封闭缓冲液配制 | 第60页 |
| ·TBS-Tween冲洗缓冲液配制 | 第60页 |
| ·抗体脱离缓冲液配制 | 第60页 |
| ·10％聚丙烯酰胺分离凝胶制备 | 第60-61页 |
| ·聚丙烯酰胺积层凝胶制备 | 第61页 |
| ·巨噬细胞的分离与培养 | 第61页 |
| ·细胞内CaMKⅡ磷酸化程度分析 | 第61-63页 |
| ·Western-blotting检测供试液制备 | 第61-62页 |
| ·细胞内p-CaMKⅡ含量分析 | 第62-63页 |
| ·蛋白质电泳 | 第62页 |
| ·蛋白质转印 | 第62页 |
| ·封闭非特异性抗体结合位点 | 第62页 |
| ·兔抗鼠磷酸化CaMKⅡ抗体结合反应 | 第62页 |
| ·HRP-羊抗兔IgG抗体结合反应 | 第62页 |
| ·摄制及冲洗胶片 | 第62-63页 |
| ·蛋白质条带分析 | 第63页 |
| ·脱离第一抗体 | 第63页 |
| ·细胞内t-CaMKⅡ含量分析 | 第63页 |
| ·封闭非特异性蛋白质结合位点 | 第63页 |
| ·兔抗鼠CaMKⅡ抗体结合反应 | 第63页 |
| ·HRP-羊抗兔IgG抗体结合反应 | 第63页 |
| ·胶片摄制及冲洗 | 第63页 |
| ·蛋白质条带分析 | 第63页 |
| ·CaMKⅡ磷酸化程度计算方法 | 第63-64页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内CREB磷酸化程度的影响实验 | 第64页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内ERK 1/2磷酸化程度的影响实验 | 第64页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内Fos蛋白表达水平的影响实验 | 第64-65页 |
| 3 实验结果 | 第65-70页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内游离钙离子浓度的影响 | 第65-66页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内CaMKⅡ磷酸化程度的影响 | 第66-67页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内CREB磷酸化程度的影响 | 第67-68页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内ERK 1/2磷酸化程度的影响 | 第68-69页 |
| ·合成鱼腥草素对巨噬细胞内Fos蛋白表达水平的影响 | 第69-70页 |
| 第二章小结 | 第70-71页 |
| 第三章 合成鱼腥草素对脾细胞增殖和产生IL-2功能以及外周血T淋巴细胞产生IL-2功能的影响研究 | 第71-82页 |
| 1 实验材料 | 第71-72页 |
| 2 实验方法 | 第72-78页 |
| ·合成鱼腥草素对脾细胞增殖反应的影响实验 | 第72-74页 |
| ·含10％新生牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第72页 |
| ·含5％新生牛血清的无钙镁离子Hank's液配制 | 第72-73页 |
| ·Con A溶液配制 | 第73页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第73页 |
| ·MTT溶液配制 | 第73页 |
| ·0.01M磷酸盐缓冲液配制 | 第73页 |
| ·十二烷基硫酸钠溶液配制 | 第73页 |
| ·脾细胞悬液制备 | 第73页 |
| ·MTT法检测脾细胞增殖反应 | 第73-74页 |
| ·合成鱼腥草素对脾淋巴细胞产生的IL-2水平的影响实验 | 第74-76页 |
| ·含有2-巯基乙醇的10％NBS RPMI-1640细胞培养液配制 | 第74页 |
| ·常规10％新生牛血清的RPMI-1640细胞培养液配制 | 第74页 |
| ·2倍浓度无钙镁离子的5％NBS Hank's液配制 | 第74页 |
| ·Con A溶液配制 | 第74-75页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第75页 |
| ·氢化可的松溶液配制 | 第75页 |
| ·MTT溶液配制 | 第75页 |
| ·0.01M磷酸盐缓冲液配制 | 第75页 |
| ·SDS溶液配制 | 第75页 |
| ·脾细胞悬液制备 | 第75页 |
| ·小鼠胸腺细胞悬液制备 | 第75页 |
| ·胸腺细胞增殖法检测脾细胞分泌的IL-2 | 第75-76页 |
| ·合成鱼腥草素对外周血T淋巴细胞产生IL-2水平的影响实验 | 第76-78页 |
| ·含10％新生牛血清的RPMI-1640细胞培养基配制 | 第76页 |
| ·合成鱼腥草素溶液配制 | 第76页 |
| ·含有IL-1α及IL-1β的Con A溶液配制 | 第76页 |
| ·制备尼龙毛柱 | 第76-77页 |
| ·淋巴细胞分离液配制 | 第77页 |
| ·淋巴细胞的分离与纯化 | 第77页 |
| ·ELISA法测定T淋巴细胞产生的IL-2 | 第77-78页 |
| 3 实验结果 | 第78-81页 |
| ·合成鱼腥草素对脾细胞增殖反应的影响 | 第78-79页 |
| ·合成鱼腥草素对脾细胞产生IL-2水平的影响 | 第79-80页 |
| ·合成鱼腥草素对外周血T淋巴细胞产生IL-2水平的影响 | 第80-81页 |
| 第三章小结 | 第81-82页 |
| 第四章 合成鱼腥草素的免疫佐剂作用研究 | 第82-91页 |
| 1 实验材料 | 第82-83页 |
| 2 实验方法 | 第83-88页 |
| ·合成鱼腥草素对绵羊红细胞抗体IgG及IgM产生的影响 | 第83-85页 |
| ·Gey's液配制 | 第83-84页 |
| ·洗涤SRBC | 第84页 |
| ·补体溶液配制 | 第84页 |
| ·动物免疫及给药程序 | 第84页 |
| ·检测血清中的抗-SRBC抗体IgG | 第84页 |
| ·检测血清中的抗-SRBC抗体IgM | 第84-85页 |
| ·合成鱼腥草素的典型免疫佐剂作用研究 | 第85-88页 |
| ·1/15M磷酸盐缓冲液配制 | 第85页 |
| ·PBS-Tween 20冲洗液配制 | 第85页 |
| ·PBS-Tween 20-明胶溶液配制 | 第85页 |
| ·BSA包被溶液配制 | 第85页 |
| ·BSA初次及再次免疫接种液配制 | 第85-86页 |
| ·含有佐剂的免疫接种液配制 | 第86页 |
| ·以合成鱼腥草素为佐剂的BSA初次免疫接种液配制 | 第86页 |
| ·以MDP为佐剂的BSA初次免疫接种液配制 | 第86页 |
| ·以合成鱼腥草素脂质体为佐剂的BSA初次免疫接种液配制 | 第86页 |
| ·0.2M醋酸缓冲液配制 | 第86页 |
| ·辣根过氧化物酶底物溶液配制 | 第86页 |
| ·BSA包被酶标板的制备 | 第86页 |
| ·免疫接种程序 | 第86页 |
| ·BSA抗体IgG标准品溶液配制 | 第86页 |
| ·ELISA法检测血清中的BSA抗体IgG含量 | 第86-88页 |
| 3 实验结果 | 第88-90页 |
| ·合成鱼腥草素对绵羊红细胞抗体IgG及IgM产生的影响 | 第88-89页 |
| ·合成鱼腥草素的典型佐剂作用 | 第89-90页 |
| 第四章小结 | 第90-91页 |
| 讨论 | 第91-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 作者简历 | 第115-116页 |
| 博士在读期间发表论文题录 | 第116页 |
