| 0 前言 | 第1-22页 |
| 一 菌种的分离鉴定与发酵条件优化 | 第22-27页 |
| 1 菌种的分离鉴定 | 第22-23页 |
| ·材料与方法 | 第22页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·琼胶酶活力测定 | 第22页 |
| ·菌种的采集 | 第22页 |
| ·菌种的分离 | 第22页 |
| ·菌种的鉴定 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-23页 |
| ·菌种的分离 | 第22-23页 |
| ·菌种的鉴定 | 第23页 |
| 2 发酵条件优化 | 第23-26页 |
| ·材料和方法 | 第23-24页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·培养条件 | 第23页 |
| ·培养时间优化 | 第23-24页 |
| ·培养温度优化 | 第24页 |
| ·培养基成分的正交实验 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-26页 |
| ·培养时间优化 | 第24页 |
| ·培养温度优化 | 第24页 |
| ·培养基成分优化 | 第24-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 二 基因克隆与序列分析 | 第27-41页 |
| 1 基因克隆 | 第27-35页 |
| ·材料与方法 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第27-28页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第28页 |
| ·基因组DNA的纯化 | 第28页 |
| ·质粒pBluescriptⅡKS(+)DNA的制备 | 第28-30页 |
| ·质粒pBS的酶切 | 第30页 |
| ·质粒pBS的去磷酸化处理 | 第30页 |
| ·目的片断与载体的连接 | 第30页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-35页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第32页 |
| ·载体pBS的制备 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第33-35页 |
| 2 阳性克隆pA5的测序及序列分析 | 第35-39页 |
| ·方法 | 第35页 |
| ·序列分析 | 第35-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 三 亚克隆的建立及琼胶酶基因agaA的序列分析 | 第41-51页 |
| 1 亚克隆的建立 | 第41-44页 |
| ·材料与方法 | 第41-42页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·亚克隆pS2400的建立 | 第41-42页 |
| ·亚克隆pS1300的建立 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-44页 |
| ·亚克隆pS2400 | 第42-44页 |
| ·亚克隆pS1300 | 第44页 |
| 2 序列分析 | 第44-49页 |
| ·GenBank Accession Number | 第44-46页 |
| ·琼胶酶基因agaA的序列分析 | 第46-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 四 重组表达与目的蛋白的纯化 | 第51-59页 |
| 1 基因表达与目的蛋白的检测 | 第52-57页 |
| ·材料和方法 | 第52-56页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·pET-24a(+)载体的制备 | 第54-55页 |
| ·目的基因的准备 | 第55页 |
| ·重组表达载体的建立 | 第55页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与表达产物的检测 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-57页 |
| ·pET-24a(+)载体的制备 | 第56-57页 |
| ·目的基因的制备 | 第57页 |
| ·表达产物的检测 | 第57页 |
| 2 目的蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·材料和方法 | 第57页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·目的蛋白的纯化与检测 | 第57页 |
| ·结果 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 五 重组酶性质研究 | 第59-66页 |
| 1 基本酶学性质 | 第59-61页 |
| ·材料和方法 | 第59页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·反应最适温度 | 第59页 |
| ·温度稳定性 | 第59页 |
| ·反应最适pH | 第59页 |
| ·pH稳定性 | 第59页 |
| ·最适底物浓度 | 第59页 |
| ·最适离子强度 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-61页 |
| ·琼胶酶的最适反应温度 | 第59页 |
| ·琼胶酶的温度稳定性 | 第59-60页 |
| ·琼胶酶反应最适pH | 第60页 |
| ·琼胶酶的pH稳定性 | 第60页 |
| ·最适底物浓度 | 第60-61页 |
| ·最适Na~+离子强度 | 第61页 |
| 2 Pseudoalteromonas sp.CY24中琼胶酶A5的α，β类型的确定 | 第61-63页 |
| ·材料与方法 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·α，β类型的确定 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-63页 |
| 3 重组琼胶酶降解终产物的研究 | 第63-64页 |
| ·材料与方法 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·结果 | 第64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
