| 第一部分 文献综述 | 第1-35页 |
| 第一章 抗菌肽的分类及分子生物学研究进展 | 第11-26页 |
| 1 引言 | 第11-12页 |
| 2 昆虫抗菌肽的生物学特性 | 第12-13页 |
| 3 昆虫抗菌肽的分类、结构特征及作用机制 | 第13-26页 |
| ·天蚕素类抗菌肽(Cecropin) | 第13-17页 |
| ·富含Cys的抗菌肽 | 第17-19页 |
| ·富含Pro残基的抗菌肽 | 第19-21页 |
| ·富含Gly的抗菌肽 | 第21-22页 |
| ·溶菌酶 | 第22-23页 |
| ·抗菌肽抗寄生虫的作用及其机制 | 第23页 |
| ·抗菌肽的抗病毒作用及其机制 | 第23-24页 |
| ·抗菌肽对肿瘤细胞及癌实体瘤的作用及其机理 | 第24-26页 |
| 第二章 昆虫抗菌肽的分子改造 | 第26-35页 |
| 1 结构与功能关系 | 第27-29页 |
| ·昆虫抗菌肽的手性特征与生物活性 | 第27页 |
| ·昆虫抗菌肽的疏水性和两亲性与生物活性 | 第27-28页 |
| ·净正电荷与生物活性 | 第28页 |
| ·α-螺旋结构与生物活性 | 第28-29页 |
| 2 抗菌肽的分子改造 | 第29-35页 |
| ·抗菌肽的分子设计 | 第29-31页 |
| ·抗菌肽分子的计算机辅助设计 | 第31-32页 |
| ·抗菌肽的抗性问题 | 第32-33页 |
| ·本论文的研究背景和目的 | 第33-35页 |
| 第二部分 一般材料与方法 | 第35-47页 |
| 第三章 材料和方法 | 第36-47页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| ·菌种和载体 | 第36页 |
| ·昆虫 | 第36页 |
| ·试剂和仪器 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-47页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第37-38页 |
| ·细菌培养 | 第38页 |
| ·质粒的少量提纯(碱法) | 第38-39页 |
| ·核酸纯化 | 第39-40页 |
| ·连接反应 | 第40页 |
| ·蚕蛹脂肪体总RNA的提取: | 第40-41页 |
| ·RT-PCR | 第41页 |
| ·感受态细胞制备及转化 | 第41-42页 |
| ·谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·GST-融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE试剂配方 | 第44页 |
| ·Peptides trincine-SDS-PAGE试剂配方 | 第44-45页 |
| ·用肠激酶进行融合蛋白的酶解 | 第45页 |
| ·碱磷酶标免疫印迹与免疫检测 | 第45-47页 |
| 第三部分 研究内容、结果和分析 | 第47-95页 |
| 第四章 家蚕抗菌肽Cecropin B基因的克隆及在E. coli中的表达 | 第48-55页 |
| 1 材料和方法 | 第48-50页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-54页 |
| ·Cecropin B基因的克隆 | 第50页 |
| ·pGEX-Cec B表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白的表达、纯化、鉴定和活性分析 | 第51-53页 |
| ·融合蛋白的切割和切割后产物的活性检测 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 Thanatin基因的合成及在E. coli中的表达 | 第55-61页 |
| 1 材料和方法 | 第55-57页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-60页 |
| ·Thanatin基因的合成 | 第57页 |
| ·pGEX-Tan表达载体的构建 | 第57页 |
| ·融合蛋白的分离纯化及电泳鉴定 | 第57-59页 |
| ·融合蛋白的切割和切割后产物的活性检测 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 抗菌肽体内抑菌活性检测系统的构建 | 第61-66页 |
| 1 材料和方法 | 第61-62页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-64页 |
| ·体内抗菌活性检测系统的建立 | 第62-63页 |
| ·诱导剂的浓度对体内活性检测系统的影响 | 第63页 |
| ·不同的宿主菌对体内活性检测系统的影响 | 第63-64页 |
| ·诱导起始菌浓度对体内活性检测系统的影响 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第七章 Thanatin N端长臂与生物功能的关系 | 第66-73页 |
| 1 材料和方法 | 第66-67页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-70页 |
| ·Thanatin及其突变体Thanatin’和Thanatin”的序列 | 第67页 |
| ·Thanatin突变体的3D结构 | 第67-69页 |
| ·Thanatin及其突变体的体内活性检测 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-73页 |
| 第八章 新型抗菌肽分子的计算机辅助设计 | 第73-84页 |
| 1 材料与方法 | 第74-75页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·杂合抗菌多肽的设计思路 | 第74页 |
| ·多肽二级结构分析 | 第74页 |
| ·空间结构分析 | 第74-75页 |
| 2 结果 | 第75-82页 |
| ·新型CB-TH杂合抗菌肽分子的序列 | 第75页 |
| ·新型杂合抗菌肽分子的二级结构分析 | 第75-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 第九章 家蚕抗菌肽-死亡素杂合肽活性筛选 | 第84-86页 |
| 1 材料和方法 | 第84-85页 |
| ·实验材料 | 第84页 |
| ·方法 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-86页 |
| ·杂合肽基因的拼接合成和序列分析 | 第85页 |
| ·杂合肽基因的体内活性筛选 | 第85-86页 |
| 第十章 家蚕抗菌肽-死亡素杂合肽基因CB-Th e在大肠杆菌中的克隆与表达 | 第86-92页 |
| 1 材料和方法 | 第86-88页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-90页 |
| ·融合表达载体的构建与筛选 | 第88页 |
| ·表达产物的电泳 | 第88-89页 |
| ·体内活性检测 | 第89页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第89页 |
| ·融合蛋白的切割和切割后产物的活性检测 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 第十一章 结论与进一步研究的建议 | 第92-95页 |
| 1 主要结论 | 第92-93页 |
| 2 进一步研究的建议 | 第93-95页 |
| Abstract | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 附录Ⅰ | 第111-113页 |
| 附录Ⅱ | 第113-114页 |
| 附录Ⅲ | 第114-120页 |
