前言 | 第1-5页 |
中文摘要 | 第5-10页 |
实验材料和仪器 | 第10-12页 |
1. 实验材料 | 第10-11页 |
1.1 材料 | 第10页 |
1.2 常用酶类 | 第10页 |
1.3 常用分子生物学试剂 | 第10页 |
1.4 分子生物学试剂盒 | 第10页 |
1.5 常规化学试剂 | 第10-11页 |
1.6 PCR引物 | 第11页 |
1.7 细胞培养试剂 | 第11页 |
1.8 激素 | 第11页 |
2. 主要仪器设备 | 第11-12页 |
实验技术路线 | 第12-13页 |
试验方法 | 第13-20页 |
1. 20αHSD基因5′侧翼区序列的PCR扩增及结构分析 | 第13-15页 |
1.1 PCR反应 | 第13页 |
1.2 PCR产物的回收 | 第13-14页 |
1.3 酶切PCR产物 | 第14页 |
1.4 回收酶切片段后进行连接反应 | 第14页 |
1.5 转化 | 第14页 |
1.6 质粒pGEM-T-2.5kb小规模抽提 | 第14-15页 |
1.7 测序、序列分析 | 第15页 |
2. 真核细胞转染重组质粒的构建 | 第15-17页 |
2.1 pGL3-2.5质粒的构建 | 第15-16页 |
2.2 pGL3-1.6、pGL3-338两质粒的构建 | 第16页 |
2.3 测序鉴定三个重组质粒 | 第16页 |
2.4 质粒的大规模制备 | 第16-17页 |
3. 细胞培养和脂质体转染 | 第17页 |
3.1 细胞培养 | 第17页 |
3.2 脂质体转染实验 | 第17页 |
4. 细胞的收获和荧光素酶表达量的测定 | 第17-18页 |
4.1 细胞的收获 | 第18页 |
4.2 荧光素酶表达量的测定 | 第18页 |
5. PRL对20αHSD基因5′侧翼区调控活性的影响 | 第18页 |
6. hCG对20αHSD基因5′侧翼区调控活性的影响 | 第18-20页 |
结果 | 第20-28页 |
讨论 | 第28-30页 |
小结 | 第30-31页 |
文献综述 | 第31-41页 |
参考文献 | 第41-51页 |
致谢 | 第51页 |