| 一、题目：人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)cDNA的克隆和表达 | 第1-5页 |
| 二、摘要 | 第5-7页 |
| 三、前言 | 第7-8页 |
| 四、材料和方法 | 第8-20页 |
| (一) 材料 | 第8-10页 |
| 1．实验试剂 | 第8-9页 |
| 2．器材 | 第9-10页 |
| (二) 实验方法 | 第10-20页 |
| 1．正常人外周血单核细胞的分离 | 第10页 |
| 2．脂多糖(LPS)诱导外周血单核细胞 | 第10页 |
| 3．酸性鈲盐—酚—氯仿法提取LPS诱导的单核细胞总RNA | 第10-11页 |
| 4．用特异性3’端引物逆转录合成G-CSFcDNA的第一条链 | 第11页 |
| 5．用PCR技术扩增G-CSF mRNA的逆转录产物 | 第11页 |
| 6．分泌型表达载体质粒的提取 | 第11-12页 |
| 7．分泌型表达载体质粒和质粒pUC_(1(?))的酶切和去磷酸 | 第12-13页 |
| 8．PCR产物(G-CSF cDNA)的磷酸化和纯化 | 第13页 |
| 9．G-CSF cDNA的克隆及鉴定 | 第13-19页 |
| 10．G-CSF cDNA的重组体在受体菌中的表达 | 第19-20页 |
| 11．双单克隆抗体夹心ELISH法检测rhG-CSF | 第20页 |
| 五、结果 | 第20-26页 |
| (一) 脂多糖诱导人外周血单核细胞产生G-CSF | 第20-21页 |
| (二) 酸性鈲盐—酚—氯仿法提取LPS诱导的单核细胞总RNA | 第21页 |
| (三) RNA PCR技术扩增G-CSF cDNA | 第21-23页 |
| (四) 分泌型表达载体质粒的提取和酶切产物的鉴定 | 第23-24页 |
| (五) hG-CSF cDNA的克隆和鉴定 | 第24-25页 |
| (六) hG-CSF cDNA重组质粒在受体菌中的表达 | 第25-26页 |
| 六、讨论 | 第26-31页 |
| (一) LPS诱导人单核细胞产生G-CSF mRNA和G-CSF | 第26-27页 |
| (二) 用RNA PCR技术扩增G-CSF cDNA | 第27-28页 |
| (三) G-CSF cDNA的克隆和表达 | 第28-29页 |
| (四) 夹心ELISA法检测G-CSF | 第29-30页 |
| (五) rhG-CSF的应用前景及进一步研究设想 | 第30-31页 |
| 七、参考文献 | 第31-38页 |
| 八、致谢 | 第38-39页 |
| 综述 | 第39-47页 |
| Reference | 第47-52页 |
