| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| 1 酵母双杂交文库及其应用 | 第17-20页 |
| ·基因文库 | 第17页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库的原理 | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库的应用 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交的优势与局限 | 第19-20页 |
| 2 纤毛虫密码子的使用及其特殊性 | 第20-22页 |
| ·纤毛虫密码子使用的特殊性 | 第20-21页 |
| ·纤毛虫 | 第20页 |
| ·实验材料-八肋游仆虫 | 第20页 |
| ·纤毛虫的基因组 | 第20-21页 |
| ·纤毛虫密码子使用的特殊性 | 第21页 |
| ·密码子使用的特殊性不利于表达文库的构建 | 第21页 |
| ·八肋游仆虫基因内无义密码子的频率与其它纤毛虫相比较少 | 第21-22页 |
| 3 蛋白质合成终止和肽链释放因子 | 第22-23页 |
| ·肽链释放因子的分类 | 第22-23页 |
| ·两类肽链释放因子的相互关系 | 第23页 |
| 4 肽链释放因子的多功能性 | 第23-28页 |
| ·肽链释放因子与细胞内微管的组装有关 | 第23-24页 |
| ·与细胞有丝分裂过程中纺锤体的形成有关 | 第23-24页 |
| ·肽链释放因子与染色体的稳定性有关 | 第24页 |
| ·肽链释放因子与细胞周期调控有关 | 第24-25页 |
| ·肽链释放因子与其他蛋白质的相互作用 | 第25-27页 |
| ·与mRNA末端的多聚[A]结合蛋白的相互作用 | 第25页 |
| ·与Upfp蛋白质的相互作用 | 第25-26页 |
| ·与PP2A相互作用 | 第26页 |
| ·与Itt1p相互作用 | 第26页 |
| ·第二类释放因子与Sla1相互作用 | 第26-27页 |
| ·肽链释放因子与肿瘤细胞的发生 | 第27页 |
| ·肽链释放因子与mRNA代谢有关 | 第27-28页 |
| 5 构建八肋游仆虫酵母双杂交文库的目的及意义 | 第28-29页 |
| 6 参考文献 | 第29-35页 |
| 第二章 八肋游仆虫酵母双杂交文库的构建 | 第35-49页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料和方法 | 第35-43页 |
| ·实验材料 | 第35-39页 |
| ·主要实验设备 | 第36页 |
| ·菌株和质粒 | 第36-37页 |
| ·主要核酸试剂 | 第37-38页 |
| ·主要酶及生化试剂 | 第38页 |
| ·主要试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·实验方法(步骤) | 第39-43页 |
| ·无菌八肋游仆虫的大量培养 | 第39页 |
| ·八肋游仆虫总RNA的提取 | 第39页 |
| ·八肋游仆虫总RNA反转录合成cDNA | 第39页 |
| ·八肋游仆虫cDNA的纯化 | 第39-40页 |
| ·用PCR的方法进一步富集cDNA | 第40页 |
| ·富集纯化后的cDNA的PCR鉴定 | 第40页 |
| ·ds cDNA与pGADT7-Rec的同源重组 | 第40-42页 |
| ·在SD/-Leu平板上筛选转化子 | 第42页 |
| ·收获转化子 | 第42页 |
| ·文库鉴定 | 第42-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-47页 |
| ·收集八肋游仆虫 | 第43页 |
| ·八肋游仆虫总RNA的提取 | 第43页 |
| ·八肋游仆虫总RNA反转录合成cDNA | 第43-44页 |
| ·八肋游仆虫cDNA的纯化 | 第44-45页 |
| ·用PCR的方法进一步富集cDNA | 第45页 |
| ·富集纯化后的cDNA的PCR鉴定 | 第45页 |
| ·八肋游仆虫cDNA文库构建 | 第45-46页 |
| ·八肋游仆虫cDNA文库鉴定 | 第46-47页 |
| 4 小结 | 第47页 |
| 5 讨论 | 第47-48页 |
| 6 参考文献 | 第48-49页 |
| 第三章 与游仆虫第二类肽链释放因子相互作用蛋白质的筛选 | 第49-65页 |
| 1 引言 | 第49页 |
| 2 材料和方法 | 第49-55页 |
| ·实验材料 | 第49-52页 |
| ·主要实验设备 | 第49-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·寡聚核苷酸 | 第50-51页 |
| ·主要酶及生化试剂 | 第51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-eRF3的构建、转化及鉴定 | 第52-53页 |
| ·酵母双杂交筛选与eRF3相互作用的蛋白 | 第53页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第53-54页 |
| ·筛选出的质粒的鉴定 | 第54页 |
| ·文库未知基因蛋白与诱饵基因蛋白相互作用的重复鉴定 | 第54页 |
| ·从游仆虫大核基因组中初步扩增与eRF3相互作用蛋白因子的全序列 | 第54-55页 |
| 3 实验结果 | 第55-62页 |
| ·酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-eRF3的构建、转化及鉴定 | 第55页 |
| ·酵母杂交筛选与eRF3相互作用的蛋白质 | 第55-56页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第56页 |
| ·筛选出的质粒的鉴定 | 第56-59页 |
| ·序列分析 | 第59-60页 |
| ·文库未知基因蛋白与诱饵基因蛋白相互作用的重复鉴定 | 第60-61页 |
| ·游仆虫大核基因组中6号基因全序列的初步扩增 | 第61-62页 |
| 4 小结 | 第62页 |
| 5 讨论 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-65页 |
| 总结与展望 | 第65-67页 |
| 附录Ⅰ | 第67-69页 |
| 附录Ⅱ | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
