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含HIV-1 env基因的质粒DNA及重组腺病毒载体疫苗的研究

主要英文缩写词第1-6页
摘要第6-8页
ABSTRACT第8-14页
第1章 绪论第14-16页
第2章:河南省有偿供血者HIV-1 外膜蛋白env基因序列分析第16-28页
   ·材料第16-17页
     ·菌株及质粒第16页
     ·工具酶和试剂第16页
     ·引物合成第16页
     ·细胞和样品第16页
     ·实验中的仪器第16-17页
   ·方法第17-18页
     ·样品处理第17页
     ·HIV-1 env 基因的扩增第17页
     ·扩增片段的回收、纯化及连接pGEM-T载体第17页
     ·阳性克隆的筛选及鉴定第17页
     ·序列测定第17页
     ·核苷酸序列分析第17-18页
     ·氨基酸序列分析第18页
     ·共有序列的获得和人类密码子的优化第18页
   ·结果与讨论第18-26页
     ·基因亚型的鉴定及系统进化树分析第18-20页
     ·推导的氨基酸序列分析第20-25页
     ·V3 环四肽序列特征第25页
     ·Gp120/Gp41 剪切位点第25-26页
     ·b12、2F5 及4E10 中和抗体识别位点第26页
   ·本章小结第26-28页
第3章:含HIV-1 env基因的质粒DNA疫苗,重组腺病毒疫苗的构建和免疫效果研究第28-50页
   ·材料第28-29页
     ·菌株和质粒第28页
     ·细胞第28页
     ·工具酶和试剂第28页
     ·血清与抗体第28页
     ·主要仪器设备第28-29页
     ·实验动物第29页
     ·引物合成第29页
   ·方法第29-35页
     ·env 共有基因序列的获得,优化和全基因合成第29页
     ·优化基因的测序鉴定和Western Blot 法鉴定第29-30页
     ·质粒DNA疫苗pVR-mod.gp160 构建及鉴定第30-31页
     ·穿梭质粒pDC316-mod.gp160 的构建,鉴定和重组腺病毒的包装第31页
     ·重组腺病毒的传代和大量扩增第31-32页
     ·重组腺病毒的鉴定第32页
     ·重组腺病毒滴度的测定第32-33页
     ·小鼠免疫第33页
     ·血清和脾脏淋巴细胞的采集第33-34页
     ·酶联免疫斑点法(ELISPOT)筛选肽库和检测细胞免疫反应第34-35页
     ·ELISA法检测体液免疫反应第35页
   ·结果第35-46页
     ·HIV-1gp160 基因共有序列的获得,优化和鉴定第35-39页
     ·Western Blot鉴定质粒pcDNA3.1-mod.gp160 中gp160 基因的表达第39-40页
     ·pVR-mod.gp160 和pDC316-mod.gp160 真核表达质粒的鉴定第40-41页
     ·重组腺病毒的鉴定结果第41-43页
     ·重组腺病毒滴度的测定第43页
     ·肽库的筛选和细胞免疫反应第43-45页
     ·ELISA法检测体液免疫反应第45-46页
   ·讨论第46-48页
     ·共有序列的获得和优化第46-47页
     ·疫苗载体的选择第47页
     ·免疫效果和免疫方案的分析第47-48页
   ·本章小结第48-50页
第4章:HIV-1 C亚型Gp120 蛋白表达、纯化及其抗体制备的研究第50-58页
   ·材料第50页
     ·菌株和质粒第50页
     ·工具酶和试剂第50页
     ·细胞和样品第50页
     ·实验中的仪器第50页
   ·方法第50-52页
     ·pET-30a-gp120 重组表达体的构建及鉴定第50-51页
     ·重组蛋白的表达及鉴定第51页
     ·表达产物的纯化及定量检测第51页
     ·C亚型HIV-1 Ggp120 多克隆抗体的制备第51页
     ·抗体滴度的测定第51-52页
     ·多抗的特异性检测第52页
   ·结果第52-54页
     ·重组表达载体的构建及鉴定第52-53页
     ·C亚型Gp120 蛋白的小量表达及产物鉴定第53页
     ·C亚型gp120 蛋白大量表达后纯化和鉴定第53页
     ·抗体滴度的测定第53-54页
     ·C亚型Gp120 多抗的特异性检测第54页
   ·讨论第54-56页
   ·本章小结第56-58页
结论第58-60页
参考文献第60-64页
附录第64-71页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第71-72页
致谢第72页

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