主要英文缩写词 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-14页 |
第1章 绪论 | 第14-16页 |
第2章:河南省有偿供血者HIV-1 外膜蛋白env基因序列分析 | 第16-28页 |
·材料 | 第16-17页 |
·菌株及质粒 | 第16页 |
·工具酶和试剂 | 第16页 |
·引物合成 | 第16页 |
·细胞和样品 | 第16页 |
·实验中的仪器 | 第16-17页 |
·方法 | 第17-18页 |
·样品处理 | 第17页 |
·HIV-1 env 基因的扩增 | 第17页 |
·扩增片段的回收、纯化及连接pGEM-T载体 | 第17页 |
·阳性克隆的筛选及鉴定 | 第17页 |
·序列测定 | 第17页 |
·核苷酸序列分析 | 第17-18页 |
·氨基酸序列分析 | 第18页 |
·共有序列的获得和人类密码子的优化 | 第18页 |
·结果与讨论 | 第18-26页 |
·基因亚型的鉴定及系统进化树分析 | 第18-20页 |
·推导的氨基酸序列分析 | 第20-25页 |
·V3 环四肽序列特征 | 第25页 |
·Gp120/Gp41 剪切位点 | 第25-26页 |
·b12、2F5 及4E10 中和抗体识别位点 | 第26页 |
·本章小结 | 第26-28页 |
第3章:含HIV-1 env基因的质粒DNA疫苗,重组腺病毒疫苗的构建和免疫效果研究 | 第28-50页 |
·材料 | 第28-29页 |
·菌株和质粒 | 第28页 |
·细胞 | 第28页 |
·工具酶和试剂 | 第28页 |
·血清与抗体 | 第28页 |
·主要仪器设备 | 第28-29页 |
·实验动物 | 第29页 |
·引物合成 | 第29页 |
·方法 | 第29-35页 |
·env 共有基因序列的获得,优化和全基因合成 | 第29页 |
·优化基因的测序鉴定和Western Blot 法鉴定 | 第29-30页 |
·质粒DNA疫苗pVR-mod.gp160 构建及鉴定 | 第30-31页 |
·穿梭质粒pDC316-mod.gp160 的构建,鉴定和重组腺病毒的包装 | 第31页 |
·重组腺病毒的传代和大量扩增 | 第31-32页 |
·重组腺病毒的鉴定 | 第32页 |
·重组腺病毒滴度的测定 | 第32-33页 |
·小鼠免疫 | 第33页 |
·血清和脾脏淋巴细胞的采集 | 第33-34页 |
·酶联免疫斑点法(ELISPOT)筛选肽库和检测细胞免疫反应 | 第34-35页 |
·ELISA法检测体液免疫反应 | 第35页 |
·结果 | 第35-46页 |
·HIV-1gp160 基因共有序列的获得,优化和鉴定 | 第35-39页 |
·Western Blot鉴定质粒pcDNA3.1-mod.gp160 中gp160 基因的表达 | 第39-40页 |
·pVR-mod.gp160 和pDC316-mod.gp160 真核表达质粒的鉴定 | 第40-41页 |
·重组腺病毒的鉴定结果 | 第41-43页 |
·重组腺病毒滴度的测定 | 第43页 |
·肽库的筛选和细胞免疫反应 | 第43-45页 |
·ELISA法检测体液免疫反应 | 第45-46页 |
·讨论 | 第46-48页 |
·共有序列的获得和优化 | 第46-47页 |
·疫苗载体的选择 | 第47页 |
·免疫效果和免疫方案的分析 | 第47-48页 |
·本章小结 | 第48-50页 |
第4章:HIV-1 C亚型Gp120 蛋白表达、纯化及其抗体制备的研究 | 第50-58页 |
·材料 | 第50页 |
·菌株和质粒 | 第50页 |
·工具酶和试剂 | 第50页 |
·细胞和样品 | 第50页 |
·实验中的仪器 | 第50页 |
·方法 | 第50-52页 |
·pET-30a-gp120 重组表达体的构建及鉴定 | 第50-51页 |
·重组蛋白的表达及鉴定 | 第51页 |
·表达产物的纯化及定量检测 | 第51页 |
·C亚型HIV-1 Ggp120 多克隆抗体的制备 | 第51页 |
·抗体滴度的测定 | 第51-52页 |
·多抗的特异性检测 | 第52页 |
·结果 | 第52-54页 |
·重组表达载体的构建及鉴定 | 第52-53页 |
·C亚型Gp120 蛋白的小量表达及产物鉴定 | 第53页 |
·C亚型gp120 蛋白大量表达后纯化和鉴定 | 第53页 |
·抗体滴度的测定 | 第53-54页 |
·C亚型Gp120 多抗的特异性检测 | 第54页 |
·讨论 | 第54-56页 |
·本章小结 | 第56-58页 |
结论 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-64页 |
附录 | 第64-71页 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
致谢 | 第72页 |