| 目录 | 第1-8页 |
| 图表索引 | 第8-10页 |
| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| 英文摘要 | 第14-16页 |
| 第一部分 胃癌侵袭转移相关基因LOXL2的研究 | 第16-81页 |
| 摘要 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 材料和方法 | 第20-48页 |
| 一.实验材料 | 第20-38页 |
| 1.组织标本 | 第20-30页 |
| 2.细胞系和实验动物 | 第30页 |
| ·细胞系及培养条件 | 第30页 |
| ·实验动物及饲养条件 | 第30页 |
| 3.菌株与质粒 | 第30-31页 |
| ·菌株 | 第30-31页 |
| ·质粒 | 第31页 |
| 4.主要试剂 | 第31-35页 |
| ·试剂盒 | 第31-32页 |
| ·抗体 | 第32页 |
| ·酶类 | 第32-33页 |
| ·DNA RNA和蛋白质分子量标志 | 第33页 |
| ·常用试剂及耗材 | 第33-35页 |
| 5.PCR引物(由Invitrogen公司合成) | 第35页 |
| ·RT-PCR引物 | 第35页 |
| ·LOXL2克隆引物 | 第35页 |
| 6.siRNA靶向序列 | 第35页 |
| 7.多肽 | 第35-36页 |
| 8.主要仪器 | 第36页 |
| 9.计算机分析软件 | 第36-38页 |
| 二.实验方法 | 第38-48页 |
| 1.RT-PCR分析 | 第38-39页 |
| ·总RNA提取 | 第38页 |
| ·逆转录 | 第38-39页 |
| ·PCR检测 | 第39页 |
| 2.Western blotting和免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation,Co-IP)实验 | 第39-41页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第39页 |
| ·蛋白定量 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳和蛋白印迹 | 第40页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第40-41页 |
| ·Co-IP | 第41页 |
| 3.免疫组织化学检测 | 第41-42页 |
| 4.质粒构建、细菌转化及质粒提取 | 第42-44页 |
| ·目的基因的定向克隆及鉴定 | 第42页 |
| ·细菌的转化 | 第42页 |
| ·使用试剂盒提取质粒DNA | 第42-43页 |
| ·使用Nucleobond Plasmid质粒提取试剂盒提取大量质粒 | 第43-44页 |
| 5.细胞体外实验 | 第44-46页 |
| ·哺乳动物细胞转染 | 第44页 |
| ·细胞增殖分析 | 第44-45页 |
| ·Transwell侵袭分析 | 第45页 |
| ·细胞基质粘附实验 | 第45页 |
| ·细胞周期检测 | 第45-46页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第46页 |
| 6.Microarray分析 | 第46页 |
| 7.动物实验 | 第46-47页 |
| ·裸鼠致瘤实验 | 第46-47页 |
| ·自发转移 | 第47页 |
| ·抗体动物治疗实验 | 第47页 |
| 8.统计方法 | 第47-48页 |
| 实验结果 | 第48-74页 |
| 一.胃癌侵袭模型的建立及其相关基因的筛选 | 第48-50页 |
| 1.体外侵袭筛选建立高侵袭的胃癌细胞系PAMC82-P3和SNU5-P3 | 第48页 |
| 2.基因芯片分析高侵袭细胞亚系和亲本细胞表达谱差异 | 第48-50页 |
| 二.LOXL2的细胞表达谱分析以及LOXL2多克隆抗体的制备 | 第50-52页 |
| 1.LOXL2在PAMC82侵袭转移模型中的表达 | 第50-51页 |
| 2.LOXL2细胞表达谱及与胃癌细胞侵袭能力的相关性分析 | 第51-52页 |
| 3.抗人LOXL2兔多克隆抗体的制备 | 第52页 |
| 三.LOXL2在临床胃癌组织标本中的表达情况 | 第52-57页 |
| 1.LOXL2在胃癌/癌旁配对组织芯片中的表达情况 | 第52-54页 |
| 2.LOXL2在胃癌/转移淋巴结配对组织芯片中的表达情况 | 第54-55页 |
| 3.LOXL2在具有完整预后临床治疗的胃癌原发瘤组织标本的表达情况 | 第55-57页 |
| 四.RNAi敲降LOXL2能够抑制胃癌细胞的侵袭、粘附以及转移能力 | 第57-64页 |
| 1.LOXL2 shRNA质粒构建及细胞转染 | 第57-59页 |
| ·LOXL2 shRNA质粒构建 | 第57页 |
| ·LOXL2 shRNA质粒转染胃癌细胞系及其表达 | 第57-59页 |
| ·稳定转染表达细胞的筛选与鉴定 | 第59页 |
| 2.LOXL2 RNAi对于胃癌细胞体外生物学行为的影响 | 第59-62页 |
| ·LOXL2 RNAi对于胃癌细胞增殖、凋亡的影响 | 第59-60页 |
| ·LOXL2 RNAi对于胃癌细胞侵袭的影响 | 第60-61页 |
| ·LOXL2 RNAi对于胃癌细胞同细胞外基质粘附能力的影响 | 第61-62页 |
| 3.LOXL2 RNAi对于胃癌细胞体内侵袭转移能力的影响 | 第62-64页 |
| ·LOXL2 RNAi对于BGC823移植瘤生长的影响 | 第62-64页 |
| ·LOXL2 RNAi对于BGC823肿瘤自发转移的影响的影响 | 第64页 |
| 五.LOXL2转染能够促进胃癌细胞的侵袭能力 | 第64-66页 |
| 1.LOXL2表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 2.LOXL2在胃癌细胞系N87中的表达及稳定表达细胞的筛选 | 第65-66页 |
| 3.LOXL2过表达对胃癌细胞侵袭能力的影响 | 第66页 |
| 六.LOXL2抗体能够抑制胃癌细胞的侵袭、粘附以及转移能力 | 第66-69页 |
| 1.LOXL2抗体处理对于胃癌细胞体外侵袭以及粘附能力的影响 | 第66页 |
| 2.LOXL2抗体治疗对于胃癌细胞体内侵袭转移能力的影响 | 第66-69页 |
| ·LOXL2抗体治疗对于BGC823移植瘤生长的影响 | 第67-68页 |
| ·LOXL2抗体治疗对于BGC823移植瘤侵袭以及自发肺转移的影响 | 第68-69页 |
| 七.分泌型的LOXL2促进胃癌侵袭分子机制方面的研究 | 第69-74页 |
| 1.分泌型的LOXL2促进胃癌细胞侵袭是通过Src/FAK信号通路 | 第69-72页 |
| 2.分泌型的LOXL2激活Src是依赖于过氧化氢的产生 | 第72-74页 |
| 讨论 | 第74-79页 |
| 小结 | 第79-81页 |
| 第二部分 预示胃癌病人生存期标志物的筛选及鉴定 | 第81-105页 |
| 前言 | 第81-83页 |
| 材料和方法 | 第83-89页 |
| 一.实验材料 | 第83-87页 |
| 1.组织标本 | 第83-86页 |
| 2.主要试剂 | 第86-87页 |
| ·试剂盒 | 第86页 |
| ·抗体 | 第86页 |
| ·常用试剂及耗材 | 第86-87页 |
| 二.实验方法 | 第87-89页 |
| 1.免疫组织化学检测 | 第87页 |
| 2.Microarray分析 | 第87页 |
| 3.统计方法 | 第87-89页 |
| 实验结果 | 第89-101页 |
| 一.侵袭芯片差异基因的初步分析以及候选基因的挑选 | 第89页 |
| 二.对候选基因进行验证,获得与胃癌临床参数相关的基因 | 第89-99页 |
| 1.S100A14染色与胃癌临床参数的相关性分析 | 第90-93页 |
| 2.CAPG染色与胃癌临床参数的相关性分析 | 第93-95页 |
| 3.LGALS1染色与胃癌临床参数的相关性分析 | 第95-97页 |
| 4.IER3染色与胃癌临床参数的相关性分析 | 第97-99页 |
| 三.分析S100A14和LGALS1与胃癌pN0期病人预后的相关性 | 第99页 |
| 四.分析S100A14和LGALS1预测pN0期病人预后的敏感性以及特异性 | 第99-101页 |
| 讨论 | 第101-104页 |
| 小结 | 第104-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 论文综述一 | 第107-122页 |
| 论文综述一 | 第122-128页 |
| 参考文献 | 第128-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 附录 | 第138-139页 |
| 个人简历 | 第139-140页 |
