| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略语 | 第7-12页 |
| 前言 | 第12-21页 |
| 1. 细菌VBNC 状态的生物特性 | 第13-14页 |
| 2. VBNC 状态的诱导因素 | 第14-15页 |
| ·温度 | 第14页 |
| ·盐度或渗透压 | 第14页 |
| ·营养水平 | 第14页 |
| ·光照 | 第14-15页 |
| ·生物因素 | 第15页 |
| 3. VBNC 细菌的检测技术 | 第15-17页 |
| ·活菌直接计数法(DVC) | 第15-16页 |
| ·基于氧化还原能力 | 第16页 |
| ·基于细胞质膜结构完整性的检测 | 第16页 |
| ·生物发光 | 第16-17页 |
| ·免疫学方法 | 第17页 |
| ·EMA-PCR | 第17页 |
| 4. VBNC 状态细菌的复苏 | 第17-18页 |
| 5. VBNC 状态细菌的致病性 | 第18-19页 |
| 6. VBNC 状态形成的原因 | 第19页 |
| 7. 本论文的主要研究内容及意义 | 第19-21页 |
| 第一章 副溶血弧菌VBNC 状态的诱导及其特征 | 第21-35页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-25页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·菌株的菌落形态 | 第22页 |
| ·菌株VP L4-90 的生长曲线 | 第22页 |
| ·菌株致病基因的携带情况 | 第22页 |
| ·菌株的培养和VBNC 状态的诱导 | 第22-23页 |
| ·不同温度对副溶血弧菌VP L4-90 在人工海水中生长的影响 | 第23页 |
| ·不同细菌的生长状况对其在低温人工海水中的生长的影响 | 第23页 |
| ·细菌密度对在低温人工海水中的副溶血弧菌VP L4-90 生长的影响 | 第23页 |
| ·细菌数测定 | 第23-24页 |
| ·总菌数测定 | 第23-24页 |
| ·活菌数测定 | 第24页 |
| ·可培养数测定 | 第24页 |
| ·VBNC 状态副溶血弧菌的扫描电镜观察 | 第24页 |
| ·流式细胞仪检测细胞内核酸的密度 | 第24-25页 |
| 2. 结果与分析 | 第25-32页 |
| ·副溶血弧菌VP L4-90 菌株的特征 | 第25-26页 |
| ·副溶血弧菌在TCBS 固体培养基上的菌落形态 | 第25页 |
| ·菌株VP L4-90 在肉汤培养基中的生长状况 | 第25-26页 |
| ·副溶血弧菌VP L4-90 的致病基因 | 第26页 |
| ·副溶血弧菌VP L4-90 进入VBNC 状态的影响因素 | 第26-30页 |
| ·温度对副溶血弧菌VP L4-90 进入VBNC 状态的影响 | 第26-27页 |
| ·细菌的生长状况 | 第27-29页 |
| ·细菌密度 | 第29-30页 |
| ·VBNC 状态的副溶血弧菌的特征 | 第30-32页 |
| ·扫描电镜下副溶血弧菌的形态特征 | 第30页 |
| ·VBNC 状态与正常状态核酸密度的差异 | 第30-31页 |
| ·AODC 及DVC 检测方法在荧光显微镜的效果 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-35页 |
| ·副溶血弧菌VP L4-90 菌株的特征 | 第32页 |
| ·副溶血弧菌VBNC 状态的诱导及该状态的一些特征 | 第32-33页 |
| ·进入VBNC 状态的影响因素 | 第33-35页 |
| ·温度 | 第33页 |
| ·细菌的生长状况 | 第33-34页 |
| ·细菌密度 | 第34-35页 |
| 第二章 VBNC 状态副溶血弧菌复苏的初步研究 | 第35-42页 |
| 1. 材料和方法 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·复苏的条件 | 第35-36页 |
| ·复苏过程中细菌总数的检测 | 第36页 |
| ·在高浓度的死菌存在时活菌的生长速度 | 第36页 |
| ·死菌的获得 | 第36页 |
| 2. 结果 | 第36-40页 |
| ·在常温下VBNC 状态副溶血弧菌的复苏 | 第36-37页 |
| ·利用最大或然法定量VBNC 状态的样品中可复苏的细菌数量 | 第37-38页 |
| ·复活过程中细菌总数的变化 | 第38-39页 |
| ·活菌可以利用死菌的营养快速生长 | 第39页 |
| ·冻溶过程中活细菌数的变化 | 第39-40页 |
| ·实时检测VBNC 状态的副溶血弧菌的复苏情况 | 第40页 |
| 3. 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 一种基于PCR 反应的活菌检测方法——EMA-PCR | 第42-51页 |
| 1. 材料和方法 | 第42-45页 |
| ·菌株和培养条件 | 第42页 |
| ·细菌DNA 提取 | 第42-43页 |
| ·EMA 与DNA 共价链接 | 第43页 |
| ·流式细胞仪检测EMA 发射的荧光 | 第43页 |
| ·普通PCR 反应条件 | 第43页 |
| ·荧光PCR 反应条件 | 第43-44页 |
| ·引物特异性实验 | 第44页 |
| ·细菌DNA 作为模板的PCR 实验 | 第44页 |
| ·菌落PCR | 第44页 |
| ·EMA 对细菌DNA 作为模板的PCR 反应的影响 | 第44页 |
| ·EMA 对死菌作为模板的PCR 反应的影响 | 第44页 |
| ·EMA 对活菌的影响 | 第44-45页 |
| 2. 结果 | 第45-50页 |
| ·引物的灵敏性及特异性 | 第45-46页 |
| ·引物的灵敏性 | 第45-46页 |
| ·引物特异性 | 第46页 |
| ·流式细胞仪检测EMA 发射荧光 | 第46-47页 |
| ·EMA-PCR | 第47-50页 |
| ·EMA 染料对以DNA 作为模板的PCR 反应的影响 | 第47页 |
| ·EMA 对以死菌作为模板的PCR 反应的影响 | 第47-48页 |
| ·EMA 对以活菌作为模板的普通PCR 反应的影响 | 第48-49页 |
| ·EMA 对以活菌作为模板的荧光PCR 反应的影响 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 高温诱导副溶血弧菌VBNC 状态及其验证 | 第51-57页 |
| 1. 材料和方法 | 第51-52页 |
| ·菌株及其培养方法 | 第51页 |
| ·高温诱导 | 第51页 |
| ·利用EMA-RT-PCR 检测高温诱导的样品 | 第51-52页 |
| ·扫描电镜观察高温诱导的副溶血弧菌形态 | 第52页 |
| ·流式细胞仪检测细胞内核酸的密度 | 第52页 |
| ·室温复苏 | 第52页 |
| 2. 结果 | 第52-55页 |
| ·VBNC 状态的确定 | 第52-53页 |
| ·扫描电镜下副溶血弧菌的形态特征 | 第53-54页 |
| ·高温诱导与正常状态副溶血弧菌核酸密度的差异 | 第54-55页 |
| ·室温复苏的效果 | 第55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 总结与展望 | 第57-59页 |
| 1. 总结 | 第57-58页 |
| 2. 展望与研究设想 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
