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玉米光周期敏感相关基因ZmTFL1的克隆及功能验证

致谢第1-9页
摘要第9-10页
第一章 文献综述第10-27页
 1 植物光周期现象及其分子机制的研究进展第10-16页
   ·植物的光周期现象第10页
   ·拟南芥光周期作用分子机制的研究进展第10-14页
     ·生物钟组分第10-12页
     ·下游的转录调控因子 CO(CONSTANS)第12-13页
     ·成花信号综合子(如 FT、SOC1、LFY 等)第13-14页
     ·抑制因子(如TFL1、EMF 等)第14页
   ·水稻光周期作用分子机制的研究进展第14-16页
 2 玉米光周期敏感及其分子机制的研究进展第16-19页
   ·热带、亚热带玉米种质的光周期敏感现象第16-17页
   ·玉米光周期敏感时期的确定第17页
   ·玉米光周期敏感相关性状基因定位的研究进展第17-18页
   ·玉米光周期敏感相关基因的克隆和研究第18-19页
 3 不同物种中 TFL1 及其同源基因的研究进展第19-22页
   ·拟南芥中 TFL1 基因的研究进展第19-21页
   ·水稻中 TFL1-like 同源基因的研究进展第21页
   ·其它物种中TFL1-like 同源基因的研究进展第21-22页
 4. 半定量RT-PCR 和实时荧光定量 PCR 技术第22-24页
   ·半定量RT-PCR第22-23页
   ·实时荧光定量PCR 技术第23-24页
     ·荧光定量 PCR 的基本原理第23页
     ·实时荧光定量PCR 与普通定量 PCR 的比较第23-24页
 5. 拟南芥基因转化方法第24-27页
   ·DNA 直接转化法第24-25页
     ·聚乙二醇(PEG)介导的基因转化第24-25页
     ·基因枪法第25页
     ·电穿孔法(electroporation)第25页
     ·显微注射法(microiniection)第25页
   ·农杆菌作载体的转化法第25-27页
第二章 玉米TFL1-like 基因的克隆第27-37页
 1. 材料与方法第27-30页
   ·供试材料第27页
   ·试剂与仪器第27页
   ·方法第27-30页
     ·总 RNA 的提取与纯化第27-28页
     ·DNA 的提取与纯化第28页
     ·cDNA 第一链的合成第28-29页
     ·玉米 TFL1-like 基因片段的克隆第29-30页
     ·分析测序结果第30页
 2.结果与分析第30-35页
   ·RNA 提取、纯化、第一链合成及检测第30-31页
   ·玉米 TFL1-like 基因的克隆第31-35页
     ·玉米 TFL1-like 基因的 PCR 扩增第31页
     ·玉米 ZmTFL1 基因序列分析第31-35页
 3. 讨论第35-37页
   ·玉米 ZmTFL1 基因属于玉米 PEBP 基因家族的成员第35-36页
   ·玉米 ZmTFL1 基因的研究前景第36-37页
第三章 玉米 ZmTFL1 基因及其相关基因的表达分析第37-47页
 1. 材料与方法第37-39页
   ·供试材料第37-38页
   ·光周期处理与取样第38页
   ·茎端分生组织的观察第38页
   ·试剂与仪器第38页
   ·方法第38-39页
     ·总 RNA 的提取与纯化第38页
     ·cDNA 第一链的合成第38页
     ·荧光定量 PCR 引物的设计第38-39页
     ·标准品的制备和标准曲线的建立第39页
     ·样品检测与数据处理第39页
 2. 结果与分析第39-44页
   ·基因标准曲线的建立第39-40页
   ·基因表达规律的研究第40-43页
     ·ZmTFL1 基因在叶片和茎尖中的表达模式第40-41页
     ·ZmTFL1 基因与 ZCN8 、DLF1 和 ZAP1 基因间的表达关系第41-43页
   ·CML288 和黄早4 不同发育时期茎端分生组织的观察第43-44页
     ·短日照条件下 CML288 和黄早4 茎端分生组织的观察第43-44页
     ·长日照条件下CML288 和黄早4 茎端分生组织的观察第44页
 3. 讨论第44-47页
   ·ZmTFL1 基因在茎端分生组织处调控玉米花序分生组织的特性第44-45页
   ·ZmTFL1 基因与 ZCN8 、DLF1 和ZAP1 基因相互作用调控玉米的开花转换过程第45-47页
第四章 利用转基因拟南芥对玉米ZmTFL1 基因功能的初步验证第47-60页
 1. 材料与方法第47-48页
   ·植物材料与种植方法第47页
   ·菌株与质粒载体第47-48页
   ·酶和试剂第48页
   ·主要仪器设备第48页
 2 实验方法第48-52页
   ·植物表达载体PBI- ZmTFL1 的构建第48-49页
     ·引物设计第48页
     ·基因序列的扩增第48页
     ·表达载体构建第48-49页
   ·拟南芥转化第49-50页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第49页
     ·重组质粒 PBI-ZmTFL1 电击转化农杆菌第49-50页
     ·PCR 验证及菌种保存第50页
     ·拟南芥转化第50页
   ·转基因拟南芥的筛选鉴定第50-52页
     ·拟南芥 T_0代种子的筛选第50-51页
     ·转基因拟南芥PCR 鉴定第51-52页
   ·拟南芥转基因植株的表型鉴定第52页
     ·拟南芥转基因植株开花时期的确定第52页
     ·拟南芥转基因植株的表型观察第52页
   ·T1代转化株中光周期相关基因的表达分析第52页
     ·光周期处理和取样第52页
     ·半定量PCR 检测相关基因的表达第52页
 3. 结果与分析第52-58页
   ·植物表达载体 PBI-ZmTFL1 的构建第52-53页
   ·重组质粒 PBI-ZmTFL1 转化农杆菌第53-54页
   ·转基因拟南芥的筛选第54页
   ·转基因拟南芥的PCR 验证第54-55页
   ·转基因拟南芥的表型观察与比较第55-57页
     ·转化株与突变体开花时间的比较第55页
     ·转化株与突变体的表型观察第55页
     ·转化株与突变体花序结构、植株高度和体表毛状体密度的比较第55-57页
   ·转化株与突变体植株中的基因表达分析第57-58页
 4. 讨论第58-60页
   ·玉米ZmTFL1 基因具有与拟南芥TFL1 基因相似的功能第58页
   ·玉米ZmTFL1 基因在开花转换中的功能第58-59页
   ·玉米 ZmTFL1 基因的研究前景第59-60页
参考文献第60-69页
英文摘要第69-70页

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