| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-27页 |
| 1 氯霉素简介 | 第14-20页 |
| ·氯霉素药物概况 | 第14-15页 |
| ·氯霉素的理化性质 | 第14页 |
| ·氯霉素作用机理 | 第14-15页 |
| ·氯霉素作用范围 | 第15页 |
| ·氯霉素残留现状 | 第15-16页 |
| ·氯霉素检测方法现状 | 第16-20页 |
| ·微生物法 | 第16页 |
| ·免疫法 | 第16-17页 |
| ·酶联免疫法 | 第17页 |
| ·放射免疫法 | 第17页 |
| ·色谱法 | 第17-19页 |
| ·高效液相色谱法 | 第17-18页 |
| ·气相色谱法 | 第18页 |
| ·气质联用法 | 第18-19页 |
| ·液质联用法 | 第19页 |
| ·各种检测方法的比较 | 第19-20页 |
| 2 小分子药物酶联免疫分析的研究方法 | 第20-25页 |
| ·半抗原 | 第21页 |
| ·人工抗原 | 第21-23页 |
| ·偶联方式的选择 | 第22页 |
| ·人工抗原纯化及鉴定 | 第22-23页 |
| ·抗体的制备与纯化 | 第23-25页 |
| ·抗体的制备 | 第23-24页 |
| ·抗体纯化 | 第24-25页 |
| ·抗原或抗体的标记 | 第25页 |
| 3 立题依据 | 第25-27页 |
| 第二章 氯霉素免疫原及包被原的研制 | 第27-36页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-30页 |
| ·活性酯法合成氯霉素免疫原和包被原 | 第28页 |
| ·重氮化法合成氯霉素免疫原和包被原 | 第28页 |
| ·半抗原-偶联物(Hap-BSA和Hap-OVA)的鉴定 | 第28-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-35页 |
| ·合成的氯霉素全抗原的紫外光谱分析 | 第30-32页 |
| ·合成的氯霉素全抗原合成效果的红外结果分析 | 第32-34页 |
| ·氯霉素全抗原纯度测定结果分析 | 第34-35页 |
| 3 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 氯霉素多克隆抗体的制备与纯化 | 第36-47页 |
| 1 材料与方法 | 第36-41页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·缓冲液体系 | 第36-37页 |
| ·其他材料 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·动物免疫 | 第37-39页 |
| ·试验动物准备 | 第37页 |
| ·免疫原的制备 | 第37-38页 |
| ·动物免疫 | 第38-39页 |
| ·抗体的初步纯化 | 第39页 |
| ·饱和硫酸铵初级沉淀 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE法检测蛋白纯度 | 第39页 |
| ·亲和层析柱的制备 | 第39-40页 |
| ·间隔臂的偶联 | 第39-40页 |
| ·氯霉素的活化 | 第40页 |
| ·氯霉素亲和凝胶的的制备 | 第40页 |
| ·偶联率的计算 | 第40页 |
| ·装柱 | 第40页 |
| ·抗体的亲和层析纯化及蛋白浓度纯度检测 | 第40-41页 |
| ·抗体效价评价测定 | 第41页 |
| ·抗体的特异性试验 | 第41页 |
| ·交叉反应率的测定 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-46页 |
| ·抗体效价测定 | 第41-42页 |
| ·抗氯霉素特异性多克隆抗体的初步纯化 | 第42页 |
| ·免疫亲和层析柱的制备 | 第42-43页 |
| ·亲和层析结果 | 第43页 |
| ·亲和层析特异性洗脱中蛋白质含量的变化 | 第43-45页 |
| ·抗体的效价试验 | 第45页 |
| ·抗体的特异性试验 | 第45-46页 |
| ·交叉反应 | 第46页 |
| 3 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 直接竞争ELISA方法的建立与优化 | 第47-65页 |
| 1 材料与方法 | 第47-54页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·缓冲液体系 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·酶标半抗原的制备 | 第48页 |
| ·酶标半抗原的活性鉴定 | 第48-49页 |
| ·ELISA方法的建立 | 第49页 |
| ·ELISA方法条件的优化 | 第49-51页 |
| ·包被缓冲液的选择 | 第49页 |
| ·洗涤条件优化 | 第49-50页 |
| ·封闭条件优化 | 第50页 |
| ·包被温度和时间的确定 | 第50页 |
| ·抗体-酶标氯霉素工作浓度优化 | 第50页 |
| ·标准曲线的建立 | 第50-51页 |
| ·抗体亲和性及检测灵敏度 | 第51页 |
| ·抗体的特异性 | 第51页 |
| ·方法的准确性试验 | 第51-52页 |
| ·样品加标回收率试验 | 第52-54页 |
| ·标准溶液的配制 | 第52页 |
| ·不同溶剂对抗原抗体结合反应的影响 | 第52页 |
| ·样品前处理 | 第52-53页 |
| ·样品基质影响试验 | 第53页 |
| ·加标回收率测定以及与商品化试剂盒的比较 | 第53页 |
| ·高效液相色谱法验证试验准确性 | 第53-54页 |
| ·保存期试验 | 第54页 |
| ·冻融试验 | 第54页 |
| ·4℃和-20℃试剂盒保存期试验 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-63页 |
| ·酶标半抗原的活性鉴定 | 第54-55页 |
| ·ELISA方法条件的建立和优化 | 第55-57页 |
| ·包被缓冲液的选择 | 第55页 |
| ·洗涤次数对洗涤效果的影响 | 第55-56页 |
| ·不同封闭物对非特异性吸附的影响 | 第56页 |
| ·包被温度和时间的选择和确定 | 第56页 |
| ·抗体-酶标氯霉素工作浓度优化 | 第56-57页 |
| ·抗体亲和性及检测灵敏度 | 第57-58页 |
| ·标准曲线的建立 | 第57页 |
| ·抗体亲和性及检测灵敏度 | 第57-58页 |
| ·不同溶剂对抗原抗体结合反应的影响 | 第58页 |
| ·抗体的特异性 | 第58-59页 |
| ·方法的准确性 | 第59页 |
| ·样品加标回收率 | 第59-62页 |
| ·样品基质影响试验 | 第59-60页 |
| ·样品加标回收率以及与商用试剂盒的比较 | 第60页 |
| ·高效液相色谱法验证试验准确性 | 第60-62页 |
| ·保存期试验结果 | 第62-63页 |
| ·酶标半抗原和包被抗体酶标板的冻融试验结果 | 第62页 |
| ·4℃和-20℃保存期试验 | 第62-63页 |
| 3 小结 | 第63-65页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第65-68页 |
| 1 氯霉素免疫原和包被原的合成 | 第65-66页 |
| 2 抗体的制备与纯化 | 第66页 |
| 3 酶标抗原的制备 | 第66-67页 |
| 4 直接竞争ELISA方法的建立与优化 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74页 |