长期施肥对水稻土亚硝酸还原酶基因（nirK、nirS）多样性的影响
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语简介 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·N_2O的温室效应及其排放源 | 第11-12页 |
| ·施肥对农田N_2O排放的影响 | 第12-14页 |
| ·反硝化作用分子机理简介 | 第14-16页 |
| ·土壤微生物多样性的研究方法 | 第16-18页 |
| ·反硝化基因的研究现状 | 第18-19页 |
| ·研究目的与内容 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-32页 |
| ·试验样地 | 第21页 |
| ·样品的采集与预处理 | 第21-22页 |
| ·土壤理化性质及反硝化速率测定 | 第22页 |
| ·土壤微生物总DNA提取 | 第22-23页 |
| ·土壤DNA提取所需试剂 | 第22-23页 |
| ·提取步骤 | 第23页 |
| ·简并引物设计 | 第23-25页 |
| ·nir基因片段的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·克隆测序 | 第26-29页 |
| ·PCR产物纯化 | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·转化反应 | 第28-29页 |
| ·筛选克隆测序 | 第29页 |
| ·序列分析 | 第29-31页 |
| ·多样性指数计算 | 第29-30页 |
| ·基因文库库容计算 | 第30页 |
| ·Chaol预测分析 | 第30页 |
| ·基因文库LIBSHUFF分析 | 第30-31页 |
| ·系统发育分析 | 第31页 |
| ·核苷酸序列登录号 | 第31-32页 |
| 3 结果分析 | 第32-46页 |
| ·土壤基本理化性质及反硝化速率 | 第32-33页 |
| ·DNA提取与nir基因片段的扩增 | 第33-36页 |
| ·土壤微生物总DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第34-36页 |
| ·序列分析 | 第36-46页 |
| ·序列片段克隆测序分析 | 第36-37页 |
| ·多样性指数分析 | 第37-38页 |
| ·库容及Chaol预测分析 | 第38-40页 |
| ·LIBSHUFF分析 | 第40-41页 |
| ·系统发育分析 | 第41-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| ·简并引物的设计 | 第46-47页 |
| ·施肥对反硝化菌群落的影响 | 第47-48页 |
| ·nirK与nirS的差异 | 第48-50页 |
| 5 结论与研究前景 | 第50-52页 |
| ·结论 | 第50页 |
| ·研究前景 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 硕士阶段发表论文 | 第63页 |
