| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-35页 |
| ·蛋白质药物概况 | 第15-19页 |
| ·蛋白质药物的种类 | 第15页 |
| ·蛋白质药物的研发趋势及分布 | 第15-16页 |
| ·蛋白质药物存在的问题及解决办法 | 第16-17页 |
| ·聚乙二醇修饰蛋白技术 | 第17-19页 |
| ·聚乙二醇的理化特性 | 第17-18页 |
| ·聚乙二醇修饰方法 | 第18页 |
| ·聚乙二醇修饰蛋白药物国内外研发现状 | 第18-19页 |
| ·蛋白质结构及其研究方法 | 第19-22页 |
| ·蛋白质基本结构 | 第19-20页 |
| ·蛋白质结构研究常用方法 | 第20-22页 |
| ·X-ray衍射 | 第20-21页 |
| ·核磁共振 | 第21页 |
| ·圆二色光谱 | 第21-22页 |
| ·蛋白质储存稳定性研究进展 | 第22-26页 |
| ·物理不稳定性 | 第22-23页 |
| ·化学不稳定性 | 第23-26页 |
| ·脱酰胺反应 | 第23-25页 |
| ·氧化作用 | 第25页 |
| ·还原作用 | 第25-26页 |
| ·水解作用 | 第26页 |
| ·其他化学降解 | 第26页 |
| ·蛋白质储存稳定性研究方法 | 第26-28页 |
| ·电泳法 | 第27页 |
| ·高效毛细管电泳法 | 第27页 |
| ·高效液相色谱法 | 第27-28页 |
| ·反相色谱 | 第27-28页 |
| ·凝胶过滤色谱 | 第28页 |
| ·生物质谱技术及其在蛋白质研究中的应用 | 第28-33页 |
| ·生物质谱技术 | 第28-29页 |
| ·电喷雾质谱技术 | 第29页 |
| ·基质辅助激光解吸附质谱技术 | 第29页 |
| ·生物质谱在蛋白质研究中的应用 | 第29-33页 |
| ·蛋白质和多肽的分子量测定 | 第30页 |
| ·蛋白质和多肽的序列分析 | 第30-31页 |
| ·蛋白质识别 | 第31页 |
| ·质谱在蛋白质脱酰胺研究中的应用 | 第31-32页 |
| ·质谱在蛋白质二硫键研究中的应用 | 第32页 |
| ·质谱在蛋白质其它翻译后修饰分析中的应用 | 第32-33页 |
| ·质谱在生物大分子相互作用研究中的应用 | 第33页 |
| ·本论文的研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 重组人血管内皮抑制素脱酰胺研究 | 第35-51页 |
| ·引言 | 第35-36页 |
| ·脱酰胺 | 第35页 |
| ·重组人血管内皮抑制素 | 第35-36页 |
| ·质谱分析重组人血管内皮抑制素的脱酰胺 | 第36-49页 |
| ·材料与仪器 | 第36-37页 |
| ·材料与试剂 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·rhEndostatin样品处理 | 第37页 |
| ·高效液相色谱质谱(HPLC-MS)分析 | 第37-38页 |
| ·飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析 | 第38页 |
| ·数据处理 | 第38-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-49页 |
| ·质谱法识别脱酰胺位点 | 第39-43页 |
| ·pH对脱酰胺过程的影响 | 第43-46页 |
| ·温度对脱酰胺过程的影响 | 第46-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 重组人粒细胞集落刺激因子二硫键研究 | 第51-69页 |
| ·引言 | 第51-53页 |
| ·二硫键 | 第51页 |
| ·重组人粒细胞集落刺激因子 | 第51-53页 |
| ·质谱分析重组人粒细胞集落刺激因子的二硫键 | 第53-66页 |
| ·材料与仪器 | 第53页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·rhG-CSF样品处理 | 第54页 |
| ·高效液相色谱质谱(HPLC-MS)分析 | 第54-55页 |
| ·基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析 | 第55页 |
| ·数据处理 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-66页 |
| ·质谱法结合胰蛋白酶酶解识别分子间二硫键 | 第56-60页 |
| ·质谱法结合胰凝乳蛋白酶酶解识别分子内二硫键 | 第60-64页 |
| ·溶液浓度对分子间二硫键的影响 | 第64-66页 |
| ·本章小结 | 第66-69页 |
| 第四章 PEG修饰蛋白脱酰胺及二硫键研究 | 第69-89页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·PEG定点修饰rhEndostatin与rhG-CSF | 第69-72页 |
| ·材料与仪器 | 第69-70页 |
| ·材料与试剂 | 第69页 |
| ·仪器 | 第69-70页 |
| ·PEG修饰重组人血管内皮抑制素 | 第70-71页 |
| ·PEG修饰过程 | 第70页 |
| ·PEG修饰产物的分离纯化 | 第70页 |
| ·MALDI-TOF MS分析PEG修饰产物 | 第70-71页 |
| ·PEG修饰重组人粒细胞集落刺激因子 | 第71-72页 |
| ·PEG修饰过程 | 第71页 |
| ·PEG修饰产物的分离纯化 | 第71-72页 |
| ·MALDI-TOF MS分析PEG修饰产物 | 第72页 |
| ·质谱法鉴别PEG修饰位点 | 第72-80页 |
| ·材料与仪器 | 第72-73页 |
| ·材料与试剂 | 第72-73页 |
| ·仪器 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-74页 |
| ·样品处理 | 第73页 |
| ·高效液相色谱质谱(HPLC-MS)分析条件 | 第73-74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-80页 |
| ·rhEndostatin的PEG修饰位点 | 第74-77页 |
| ·rhG-CSF的PEG修饰位点 | 第77-80页 |
| ·质谱法分析PEG修饰rhEndostatin的脱酰胺 | 第80-84页 |
| ·材料与仪器 | 第80页 |
| ·试验方法 | 第80页 |
| ·结果与讨论 | 第80-84页 |
| ·质谱法识别PEG修饰后脱酰胺位点 | 第80页 |
| ·pH对脱酰胺过程的影响 | 第80-83页 |
| ·温度对脱酰胺过程的影响 | 第83-84页 |
| ·质谱法分析PEG修饰rhG-CSF的二硫键 | 第84-87页 |
| ·材料与仪器 | 第84页 |
| ·试验方法 | 第84页 |
| ·结果与讨论 | 第84-87页 |
| ·质谱法识别分子内及分子间二硫键 | 第84-85页 |
| ·溶液浓度对分子间二硫键的影响 | 第85-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 第五章 结论 | 第89-91页 |
| ·主要研究结论 | 第89页 |
| ·后续研究设想 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 附录 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第101-103页 |
| 作者及导师简介 | 第103页 |
