| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-19页 |
| 符号说明 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-23页 |
| 第一章 ARE 调控的绿色荧光蛋白真核报告基因系统的构建 | 第23-63页 |
| 引言 | 第23-24页 |
| 1 实验材料 | 第24-27页 |
| ·质粒和菌株 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·工具酶 | 第25页 |
| ·试剂盒 | 第25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·主要试剂及配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-50页 |
| ·实验流程 | 第27页 |
| ·ARE 的设计、退火和磷酸化 | 第27-29页 |
| ·ARE 序列的设计与合成 | 第27页 |
| ·ARE 序列的退火 | 第27-29页 |
| ·ARE 序列的磷酸化 | 第29页 |
| ·TK 基本启动子的重组与克隆 | 第29-34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| ·TK 基本启动子的重组 | 第30-32页 |
| ·TK 基本启动子的 TA 克隆 | 第32-34页 |
| ·ARE 调控的绿色荧光蛋白（GFP）报告载体的构建 | 第34-50页 |
| ·pTK-GFP 载体的构建 | 第34-37页 |
| ·pTK-GFP/neo 真核报告载体的构建 | 第37-39页 |
| ·pARE-TK-GFP/neo 真核报告载体的构建 | 第39-42页 |
| ·p2ARE-TK-GFP/neo 真核报告载体的构建 | 第42-45页 |
| ·p3ARE-TK-GFP/neo 真核报告载体的构建 | 第45-47页 |
| ·p4ARE-TK-GFP/neo 真核报告载体的构建 | 第47-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-55页 |
| ·重组TK 基本启动子的鉴定 | 第50-51页 |
| ·TA 克隆的鉴定 | 第51页 |
| ·pTK-GFP 表达载体的鉴定 | 第51-52页 |
| ·pTK-GFP/neo 真核报告载体的鉴定 | 第52-53页 |
| ·pARE-TK-GFP/neo 真核报告载体的鉴定 | 第53页 |
| ·重组报告载体p2ARE-TK-GFP/neo 、p3ARE-TK-GFP/neo和p4ARE-TK-GFP/neo的鉴定 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| ·ARE 的选择 | 第55-56页 |
| ·TK 启动子的选择 | 第56-57页 |
| ·报告基因的选择 | 第57-58页 |
| 5 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 第二章 ARE 调控的绿色荧光蛋白报告基因细胞筛选模型的建立 | 第63-78页 |
| 引言 | 第63-64页 |
| 1 实验材料 | 第64-66页 |
| ·细胞株 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64页 |
| ·试剂盒 | 第64页 |
| ·主要试剂及配制 | 第64-65页 |
| ·主要仪器 | 第65-66页 |
| 2 实验方法 | 第66-71页 |
| ·重组质粒的大量制备与纯化 | 第66-67页 |
| ·质粒制备 | 第66-67页 |
| ·质粒纯化 | 第67页 |
| ·HepG2 细胞的培养 | 第67-68页 |
| ·细胞的培养 | 第67页 |
| ·细胞的传代及铺板 | 第67-68页 |
| ·转染细胞 | 第68页 |
| ·稳定转染细胞系的建立 | 第68-69页 |
| ·转基因细胞的保存 | 第69页 |
| ·转基因细胞的相对荧光发光度测定 | 第69-70页 |
| ·转基因细胞 GFP 的基础和诱导表达水平检测 | 第70页 |
| ·转基因细胞时间效应关系测定 | 第70页 |
| ·细胞模型的实验验证 | 第70-71页 |
| ·数据分析 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-75页 |
| ·细胞模型的建立 | 第71页 |
| ·细胞 GFP 的基础和诱导表达水平 | 第71-72页 |
| ·转基因细胞时间效应关系测定 | 第72-73页 |
| ·细胞模型的实验验证 | 第73-75页 |
| ·PDTC 诱导 GFP 表达的剂量依赖关系 | 第73-74页 |
| ·tBHQ 诱导 GFP 表达的剂量依赖关系 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-76页 |
| 5 小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-78页 |
| 第三章 重组红、绿荧光蛋白双信号转基因细胞筛选模型的构建 | 第78-92页 |
| 引言 | 第78页 |
| 1 实验材料 | 第78-80页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第78-79页 |
| ·培养基 | 第79页 |
| ·工具酶 | 第79页 |
| ·试剂盒 | 第79页 |
| ·引物 | 第79-80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| ·主要仪器 | 第80页 |
| 2 实验方法 | 第80-86页 |
| ·红色荧光蛋白及其启动子的扩增与 TA 克隆 | 第80-82页 |
| ·红色荧光蛋白及其启动子的扩增 | 第80-81页 |
| ·扩增产物回收 | 第81页 |
| ·红色荧光蛋白及其启动子的 TA 克隆 | 第81-82页 |
| ·红、绿双色荧光蛋白报告载体的构建 | 第82-85页 |
| ·双信号转基因细胞模型的构建 | 第85页 |
| ·重组质粒的大量制备与纯化 | 第85页 |
| ·HepG2 细胞的培养 | 第85页 |
| ·转染细胞 | 第85页 |
| ·稳定转染细胞系的建立 | 第85页 |
| ·转基因细胞的保存 | 第85页 |
| ·双信号转基因细胞的相对荧光发光度测定 | 第85-86页 |
| ·细胞模型的实验验证 | 第86页 |
| ·数据分析 | 第86页 |
| 3 结果与分析 | 第86-90页 |
| ·TA克隆的鉴定 | 第86-87页 |
| ·p4ARE-TK-GFP/DsRed/neo 报告载体的鉴定 | 第87-88页 |
| ·双信号转基因细胞模型的建立 | 第88-89页 |
| ·双信号转基因细胞模型的实验验证 | 第89-90页 |
| 4 讨论 | 第90页 |
| 5 小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-92页 |
| 第四章 细胞模型用于预防肿瘤中药的筛选研究 | 第92-106页 |
| 引言 | 第92-93页 |
| 1 实验材料 | 第93-94页 |
| ·细胞株 | 第93页 |
| ·培养基 | 第93页 |
| ·主要试剂 | 第93-94页 |
| ·主要仪器 | 第94页 |
| 2 实验方法 | 第94-97页 |
| ·细胞复苏 | 第94-95页 |
| ·中药单体的筛选 | 第95-96页 |
| ·初筛 | 第95页 |
| ·剂量效应关系研究 | 第95-96页 |
| ·中药有效部位的筛选 | 第96-97页 |
| ·半枝莲总黄酮注射液的制备 | 第96页 |
| ·有效部位的筛选 | 第96-97页 |
| ·中药复方和单味中药提取物的筛选 | 第97页 |
| ·六味地黄胶囊及组成该方的单味中药提取物的筛选 | 第97页 |
| ·四君子汤及组成该方的单味中药提取物的筛选 | 第97页 |
| ·判断标准 | 第97页 |
| 3 结果与分析 | 第97-103页 |
| ·中药单体的筛选 | 第97-101页 |
| ·中药单体的初筛 | 第97-99页 |
| ·剂量效应关系 | 第99-101页 |
| ·有效部位的筛选 | 第101页 |
| ·中药复方和单味中药提取物的筛选 | 第101-103页 |
| 4 讨论 | 第103-104页 |
| 5 小结 | 第104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 全文总结 | 第106-108页 |
| 特色与创新之处 | 第108-109页 |
| 文献综述 | 第109-137页 |
| 致谢 | 第137-139页 |
| 攻读学位期间发表论文及专利情况 | 第139页 |
