| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1. 刺糖多孢菌及其次生代谢物多杀菌素的研究进展 | 第12-21页 |
| ·多杀菌素的结构特点 | 第12-13页 |
| ·多杀菌素的物理及化学性质 | 第13-14页 |
| ·多杀菌素的物理性质 | 第13-14页 |
| ·多杀菌素的化学性质 | 第14页 |
| ·多杀菌素的杀虫活性与作用机理 | 第14-15页 |
| ·多杀菌素的生物合成 | 第15-19页 |
| ·多杀菌素生物合成相关基因簇 | 第16-17页 |
| ·聚酮链的生物合成与修饰 | 第17-18页 |
| ·鼠李糖与福乐糖胺的生物合成与连接 | 第18-19页 |
| ·提高多杀菌素产量 | 第19-21页 |
| ·常规理化诱变育种筛选高产菌 | 第19页 |
| ·定向改造多杀菌素调控基因 | 第19-21页 |
| 2 链霉菌次生代谢调控的研究进展 | 第21-22页 |
| 3 铵转运载体(ammonium transporter)的研究进展 | 第22-25页 |
| ·铵载体基因分布 | 第23-24页 |
| ·铵载体蛋白AmtB | 第24-25页 |
| 4. 立题依据和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-39页 |
| 1. 材料 | 第27-30页 |
| ·供试菌株 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第29页 |
| ·工具酶 | 第29页 |
| ·PCR引物及产物测序 | 第29-30页 |
| ·试剂盒 | 第30页 |
| ·常用溶液和缓冲液 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第30页 |
| ·大肠杆菌热转感受态制备溶液 | 第30页 |
| ·大肠杆菌电转感受态制备溶液 | 第30页 |
| 2 研究方法 | 第30-39页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第30-31页 |
| ·S.spinosa S04-41基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·提取大肠杆菌质粒DNA | 第32-33页 |
| ·PCR扩增amt基因 | 第33-34页 |
| ·DNA的连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第35页 |
| ·转化子的快速筛选 | 第35页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·amt基因的生物信息学分析 | 第36页 |
| ·基本参数的比较 | 第36页 |
| ·二级结构的预测比较 | 第36页 |
| ·amt基因链霉菌表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·链霉菌与大肠杆菌的接合转移 | 第37-38页 |
| ·发酵培养 | 第38页 |
| ·放线紫红素产量的测定 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-48页 |
| 1 刺糖多孢菌amt基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·刺糖多孢菌amt基因的PCR扩增 | 第39页 |
| ·氨转移酶基因的TA克隆 | 第39-40页 |
| 2 Amt蛋白的生物信息学分析 | 第40-41页 |
| ·一级结构的预测 | 第40-41页 |
| ·二级结构的预测 | 第41页 |
| 3 amt基因在链霉菌中的表达 | 第41-48页 |
| ·利用pMF载体表达amt基因 | 第41-42页 |
| ·Amt蛋白在天蓝色链霉菌M145和变铅青链霉菌TK24中的异源表达 | 第42-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-51页 |
| 第五章 主要结论和今后的研究设想 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第62-63页 |
| 课题受资助的基金项目 | 第63-64页 |
