| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 1 引言 | 第17-45页 |
| ·类风湿性关节炎动物模型的研究进展 | 第17-22页 |
| ·单纯诱导性RA 动物模型 | 第17-20页 |
| ·病证结合的RA 动物模型 | 第20-21页 |
| ·转基因RA 动物模型 | 第21-22页 |
| ·Ⅱ型胶原抗体诱导的RA 动物模型 | 第22页 |
| ·类风性关节炎主要病因 | 第22-25页 |
| ·感染因素 | 第22-24页 |
| ·遗传因素 | 第24-25页 |
| ·类风湿性关节炎发病机理的研究进展 | 第25-30页 |
| ·细胞水平 | 第25-27页 |
| ·分子水平 | 第27-30页 |
| ·IL-17 与 RA 疾病 | 第30-33页 |
| ·IL-17 结构与成员 | 第30页 |
| ·IL-17 受体 | 第30-31页 |
| ·作用机制 | 第31页 |
| ·生物学作用 | 第31-33页 |
| ·多聚蛋白聚糖酶与RA 疾病 | 第33-35页 |
| ·结构 | 第33-34页 |
| ·在RA 关节炎中作用 | 第34-35页 |
| ·调节机制 | 第35页 |
| ·软骨细胞的培养概况 | 第35-37页 |
| ·蛋白质免疫印迹技术研究进展 | 第37-38页 |
| ·实时定量PCR 技术研究进展 | 第38-42页 |
| ·原理 | 第38-40页 |
| ·在医学研究中的应用 | 第40-42页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第42-45页 |
| 2 材料 | 第45-50页 |
| ·制备RA 动物模型的主要试剂 | 第45页 |
| ·ELISA 定量检测主要试剂 | 第45页 |
| ·培养软骨细胞主要试剂 | 第45-46页 |
| ·蛋白质免疫印迹主要试剂 | 第46-47页 |
| ·实时定量PCR 主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器与设备 | 第47-48页 |
| ·试验动物 | 第48页 |
| ·引物合成 | 第48-50页 |
| 3 方法 | 第50-60页 |
| ·类风湿性关节炎动物模型的制备 | 第50-53页 |
| ·造模方法 | 第50页 |
| ·血清、踝关节组织的采集 | 第50页 |
| ·关节炎指数的判定标准与发病率 | 第50-51页 |
| ·抗Ⅱ型胶原抗体的检测 | 第51页 |
| ·IL-1β的ELISA 定量检测 | 第51-52页 |
| ·IL-17、TNF-α的ELISA 定量检测 | 第52页 |
| ·踝关节组织病理切片的制作 | 第52-53页 |
| ·影像学检查 | 第53页 |
| ·数据分析 | 第53页 |
| ·软骨细胞的培养 | 第53-54页 |
| ·原代细胞的分离培养 | 第53页 |
| ·传代培养 | 第53-54页 |
| ·冻存与复苏 | 第54页 |
| ·IL-17 诱导软骨细胞 | 第54-55页 |
| ·Western blot 检测软骨细胞ADAMTS-4 的蛋白质表达 | 第55-57页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE 分离ADAMTS-4 基因表达产物 | 第55-56页 |
| ·ADAMTS-4 的半干式电转移 | 第56页 |
| ·ADAMTS-4 的免疫学反应 | 第56页 |
| ·化学发光检测ADAMTS-4 的表达 | 第56-57页 |
| ·实时定量PCR 检测软骨细胞ADAMTS-4 的转录水平 | 第57-60页 |
| ·软骨细胞总RNA 提取和质量鉴定 | 第57页 |
| ·软骨细胞ADAMTS-4 基因cDNA 的制备 | 第57页 |
| ·软骨细胞ADAMTS-4 基因的PCR 扩增 | 第57-58页 |
| ·实时定量PCR 体系确定 | 第58-59页 |
| ·软骨细胞ADAMTS-4 mRNA 表达的实时定量PCR 检测 | 第59页 |
| ·数据分析 | 第59-60页 |
| 4 结果 | 第60-73页 |
| ·RA 动物模型制备结果 | 第60-64页 |
| ·RA 动物模型的临床症状 | 第60页 |
| ·RA 大鼠的体重变化 | 第60页 |
| ·发病率 | 第60-61页 |
| ·关节炎指数结果 | 第61-62页 |
| ·抗CⅡ抗体的检测结果 | 第62页 |
| ·IL-1β、TNF-α和IL-17 的水平 | 第62-63页 |
| ·踝关节组织病理学检查结果 | 第63页 |
| ·踝关节影象学检查结果 | 第63-64页 |
| ·软骨细胞培养结果 | 第64-65页 |
| ·原代软骨细胞培养结果 | 第64页 |
| ·传代软骨细胞培养结果 | 第64页 |
| ·软骨细胞冻存复苏结果 | 第64-65页 |
| ·ADAMTS-4 免疫印迹分析结果 | 第65-67页 |
| ·软骨细胞上清液蛋白浓度 | 第65页 |
| ·ADAMTS-4 SDS-PAGE 电泳结果 | 第65页 |
| ·ADAMTS-4 免疫分析结果 | 第65-67页 |
| ·软骨细胞的ADAMTS-4 的实时定量PCR 结果 | 第67-73页 |
| ·软骨细胞RNA 提取质量鉴定结果 | 第67页 |
| ·软骨细胞ADAMTS-4 PCR 扩增片段鉴定 | 第67-68页 |
| ·实时定量PCR 体系 | 第68-71页 |
| ·ADAMTS-4 的实时定量PCR 结果 | 第71-73页 |
| 5 讨论 | 第73-84页 |
| ·RA 动物模型制备 | 第73-76页 |
| ·造模方法的选择 | 第73页 |
| ·模型动物血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平 | 第73-74页 |
| ·TNF-α在RA 中的作用 | 第74-75页 |
| ·IL-1β在RA 中的作用 | 第75页 |
| ·RA 疾病模型中IL-17 升高的意义 | 第75-76页 |
| ·大鼠组织病理学与影像学改变 | 第76页 |
| ·软骨细胞的培养 | 第76-79页 |
| ·获取原代软骨细胞的方法选择 | 第76-77页 |
| ·培养条件的选择 | 第77-78页 |
| ·生长特点 | 第78页 |
| ·RA 中软骨细胞的作用 | 第78-79页 |
| ·ADAMTS-4 蛋白质免疫印迹结果分析 | 第79-81页 |
| ·电转印中转膜缓冲液的选择和转膜效率 | 第79页 |
| ·转移膜的封闭 | 第79页 |
| ·免疫印迹中抗体的选择 | 第79-80页 |
| ·底物化学发光的选择 | 第80页 |
| ·ADAMTS-4 蛋白质免疫印迹结果分析 | 第80-81页 |
| ·软骨细胞ADAMTS-4 基因实时PCR 检测结果探讨 | 第81-84页 |
| ·内参基因的选择 | 第81页 |
| ·相对定量方法的选择 | 第81-82页 |
| ·IL-17 诱导软骨细胞后检测靶标的选择 | 第82页 |
| ·IL-17 诱导软骨细胞上调表达ADAMTS-4 的探讨 | 第82-84页 |
| 6 结论 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 附录 | 第98-100页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第100页 |
