| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 杜氏盐藻RbcS基因家族新成员cDNA片段的克隆及序列分析 | 第18-62页 |
| 1 简并引物扩增杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的部分cDNA片及序列分析 | 第18-32页 |
| ·材料 | 第18-21页 |
| ·主要仪器与设备 | 第18-19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·常用试剂和培养基的配制 | 第19-20页 |
| ·所用藻株,菌株和质粒 | 第20页 |
| ·杜氏盐藻的培养基和培养条件 | 第20-21页 |
| ·引物的设计方法 | 第21页 |
| ·引物序列 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·杜氏盐藻细胞总RNA的提取方法 | 第21-22页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第22-23页 |
| ·简并引物扩增目的基因的PCR组分和反应条件 | 第23-24页 |
| ·PCR产品的胶回收纯化 | 第24页 |
| ·PCR产品胶回收片段与pMD18-T克隆载体的连接 | 第24-25页 |
| ·质粒的转化和蓝白斑筛选试验 | 第25-26页 |
| ·挑单克隆摇菌,质粒的小量提取和酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·测序和序列分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·杜氏盐藻细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·PCR产物克隆与双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·所得序列分析 | 第29-30页 |
| ·所得序列的同源性分析 | 第30-32页 |
| 2 5’RACE法扩增杜氏盐藻RbcS2的5’末端序列及其序列分析 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·常用试剂和培养基的配制 | 第32页 |
| ·所用藻株,菌株和质粒 | 第32-33页 |
| ·杜氏盐藻的培养基和培养条件 | 第33页 |
| ·5’RACE的原理及其所需引物 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-38页 |
| ·杜氏盐藻细胞总RNA的提取方法 | 第34页 |
| ·提取的RNA的处理过程 | 第34-36页 |
| ·反转录反应合成cDNA第一链 | 第36页 |
| ·5’RACE巢式PCR | 第36-37页 |
| ·两次PCR产物的胶回收纯化 | 第37页 |
| ·两次PCR产品胶回收片段与pMD18-T克隆载体的连接 | 第37页 |
| ·质粒的转化和蓝白斑筛选试验 | 第37-38页 |
| ·挑单克隆摇菌,质粒的小量提取和酶切鉴定 | 第38页 |
| ·测序和序列分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·两次PCR产物的克隆与酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·所得的序列分析 | 第39-41页 |
| 3 3’RACE法扩增杜氏盐藻RbcS2的3’末端序列及其序列分析 | 第41-48页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·常用试剂和培养基的配制 | 第41页 |
| ·所用藻株,菌株和质粒 | 第41页 |
| ·杜氏盐藻的培养基和培养条件 | 第41页 |
| ·3’RACE的原理及其所需引物 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·杜氏盐藻细胞总RNA的提取方法 | 第42-43页 |
| ·3’RACE将RNA反转录成第一链cDNA | 第43页 |
| ·3’RACE巢式PCR | 第43-44页 |
| ·两次PCR产物的胶回收纯化 | 第44页 |
| ·两次PCR产品胶回收片段与pMD18-T克隆载体的连接 | 第44页 |
| ·质粒的转化和蓝白斑筛选试验 | 第44页 |
| ·挑单克隆摇菌,质粒的小量提取和酶切鉴定 | 第44页 |
| ·测序和序列分析 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·两次PCR产物的克隆与酶切鉴定 | 第44-46页 |
| ·所得的序列分析 | 第46-48页 |
| 4 杜氏盐藻RbcS2基因cDNA序列全长的拼接和序列分析 | 第48-54页 |
| ·RbcS2 cDNA全长拼接结果和序列分析 | 第48-49页 |
| ·RbcS2 cDNA全长序列同源性分析 | 第49-51页 |
| ·RbcS2 cDNA全长序列密码子使用偏好性分析 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·高质量RNA提取注意事项 | 第52页 |
| ·简并引物设计原则 | 第52-53页 |
| ·RACE方法的使用 | 第53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 5 杜氏盐藻RbcS2基因耐盐功能分析 | 第54-61页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·所用杜氏盐藻藻株,培养基和培养条件 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR所用的引物序列 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·杜氏盐藻细胞总RNA的提取方法 | 第55页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第55页 |
| ·目的片段和内参片段的PCR鉴定引物特异性 | 第55-56页 |
| ·SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR扩增反应 | 第56页 |
| ·数据处理及分析 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-59页 |
| ·杜氏盐藻细胞总RNA的提取 | 第56-57页 |
| ·RbcS2和内参基因GAPDH的RT-PCR结果 | 第57-58页 |
| ·荧光定量PCR结果 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 综述 盐胁迫对光和作用影响的研究概况 | 第65-73页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 个人简历 | 第73页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第73页 |
| 在学期间参加的研究项目及学术会议 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录A | 第75-78页 |
