| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·猪流感病毒(SIV)概况 | 第13-18页 |
| ·猪流感的流行病学 | 第14-15页 |
| ·SIV的生物学特性 | 第15-16页 |
| ·血凝特性 | 第15页 |
| ·抗原性 | 第15页 |
| ·增殖特性 | 第15-16页 |
| ·SIV基因结构与编码蛋白 | 第16-18页 |
| ·SIV的基因组结构 | 第16页 |
| ·SIV的基因编码蛋白 | 第16-18页 |
| ·血凝素蛋白(HA) | 第16-17页 |
| ·神经氨酸酶(NA) | 第17页 |
| ·核蛋白(NP) | 第17-18页 |
| ·基脂蛋白(M_1、M_2、M_3) | 第18页 |
| ·聚合酶(PB_1、PB_2、PA) | 第18页 |
| ·非结构蛋白(NS) | 第18页 |
| ·猪流感病毒诊断技术研究进展 | 第18-22页 |
| ·传统的实验室诊断技术 | 第18-20页 |
| ·电镜技术 | 第18-19页 |
| ·病毒分离和鉴定 | 第19页 |
| ·血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第19页 |
| ·中和试验(serum neutralizationtest,SN) | 第19页 |
| ·琼脂凝胶扩散试验(agargel immunodiffusion,AGID) | 第19页 |
| ·免疫荧光法(immunofluorescence assay,IFA) | 第19-20页 |
| ·酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) | 第20页 |
| ·免疫过氧化酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA) | 第20页 |
| ·免疫组织化学试验 | 第20页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第20-22页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第20-21页 |
| ·实时荧光定量PCR(realtime fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR) | 第21页 |
| ·依赖核酸序列的扩增法 | 第21页 |
| ·核酸探针技术 | 第21页 |
| ·内源性病毒编码酶检测法 | 第21-22页 |
| ·基因芯片技术 | 第22页 |
| ·蛋白质芯片(protein microarray) | 第22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 猪流感病毒H_3N_8亚型NA基因的克隆和原核表达 | 第24-37页 |
| 前言 | 第24页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·病毒与菌种 | 第24页 |
| ·质粒及主要试剂 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·病毒RNA的提取及反转录 | 第25-26页 |
| ·PCR反应扩增目的基因 | 第26页 |
| ·PCR产物回收和纯化 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第27-29页 |
| ·回收的NA基因片段的处理 | 第27-28页 |
| ·表达载体的处理 | 第28页 |
| ·双酶切后的目的基因和表达载体的连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·转化菌的诱导表达及最佳诱导条件的确定 | 第29页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第29-30页 |
| ·可溶性表达产物的提取 | 第30页 |
| ·不溶性表达产物(包涵体)的纯化和复性 | 第30-31页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·NA基因的RT-PCR扩增结果 | 第31-32页 |
| ·重组表达质粒的鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·转化菌的诱导表达 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第35页 |
| ·融合蛋白的表达及包涵体的提取 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的免疫活性 | 第36-37页 |
| 第三章 猪流感病毒H3N8亚型重组NA蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第37-55页 |
| 前言 | 第37页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·抗原 | 第37页 |
| ·血清和酶标抗体 | 第37页 |
| ·ELISA相关溶剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器和设备 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·间接ELISA具体操作步骤 | 第38-39页 |
| ·制备抗原包被板 | 第38页 |
| ·加待检血清 | 第38页 |
| ·加酶标抗体 | 第38-39页 |
| ·加底物OPD | 第39页 |
| ·加终止液 | 第39页 |
| ·测定各孔光吸收值(OD_(630)nm) | 第39页 |
| ·抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第39页 |
| ·封闭液对比试验 | 第39页 |
| ·封闭时间对比试验 | 第39-40页 |
| ·一抗最佳作用时间确定试验 | 第40页 |
| ·酶标抗体稀释倍数确定试验 | 第40页 |
| ·酶标抗体作用时间的确定 | 第40页 |
| ·阴阳性标准对照的确定 | 第40页 |
| ·符合性试验 | 第40页 |
| ·特异性试验 | 第40-41页 |
| ·重复性实验 | 第41页 |
| ·批内重复试验 | 第41页 |
| ·批间重复试验 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-53页 |
| ·血清稀释度和抗原包被浓度的确定 | 第41-43页 |
| ·封闭液对比试验 | 第43-44页 |
| ·封闭时间对比试验 | 第44-45页 |
| ·一抗最佳作用时间确定试验 | 第45-46页 |
| ·最佳酶标抗体稀释倍数确定试验 | 第46-47页 |
| ·酶标抗体作用时间的确定 | 第47-48页 |
| ·阴/阳性标准对照的确定 | 第48-49页 |
| ·符合性试验 | 第49-50页 |
| ·特异性试验 | 第50页 |
| ·重复性试验 | 第50-53页 |
| ·批内重复性试验 | 第50-51页 |
| ·批间重复性试验 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
