| 内容提要 | 第1-11页 |
| 第一篇 引言 | 第11-27页 |
| 第一章 选题的理论和实际意义及研究背景 | 第11-12页 |
| 第二章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第12-13页 |
| 2 PRRSV 的研究进展 | 第13-20页 |
| ·PRRSV 的形态及理化学特性 | 第13-14页 |
| ·PRRSV 的主要生物学特性 | 第14-15页 |
| ·PRRSV 的遗传和变异 | 第15-16页 |
| ·PRRSV 基因组结构及编码的结构蛋白 | 第16-20页 |
| 3 PRRS 免疫学研究进展 | 第20页 |
| 4 PRRS 疫苗研究进展 | 第20-24页 |
| ·弱毒疫苗和灭活疫苗 | 第21-22页 |
| ·亚单位疫苗 | 第22页 |
| ·基因疫苗 | 第22-23页 |
| ·重组载体疫苗 | 第23-24页 |
| 5 腺病毒简介 | 第24-27页 |
| 第二篇 研究内容 | 第27-70页 |
| 第一章 PRRS 地方毒株的分离鉴定及结构基因的分析 | 第27-46页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| ·病料 | 第28页 |
| ·细胞株与菌株 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-33页 |
| ·细胞复苏、培养及传代 | 第29页 |
| ·病料处理 | 第29页 |
| ·病毒的分离 | 第29-30页 |
| ·病毒 TCID50 的测定 | 第30页 |
| ·核酸型鉴定 | 第30页 |
| ·病毒理化特性的测定 | 第30页 |
| ·感染谱的测定 | 第30-31页 |
| ·血凝试验 | 第31页 |
| ·中和试验 | 第31页 |
| ·病毒细胞培养物总 RNA 的提取 | 第31页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR 产物的回收与纯化 | 第32页 |
| ·回收产物的连接 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·碱裂解法提取重组质粒 | 第32页 |
| ·阳性克隆质粒的限制性内切酶酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆质粒的序列测定与分析 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-43页 |
| ·分离病毒结果 | 第33页 |
| ·TCID_(50) 的测定结果 | 第33-34页 |
| ·核酸型鉴定结果 | 第34页 |
| ·病毒理化特性的测定结果 | 第34-35页 |
| ·感染谱的测定结果 | 第35页 |
| ·病毒的红细胞血凝试验结果 | 第35页 |
| ·中和试验的结果 | 第35页 |
| ·病毒的 RT-PCR 检测 | 第35-37页 |
| ·PRRSV JL-0605 株部分基因核苷酸序列测定及其分析 | 第37-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 5 小结 | 第44-46页 |
| 第二章 PRRSV GP5 与 M 蛋白重组犬2 型腺病毒的构建及表达 | 第46-58页 |
| 1 材料 | 第46-47页 |
| ·质粒、菌株、病毒与细胞 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-52页 |
| ·PRRSV JL-0605 株 GP5 基因和 M 基因的扩增 | 第47页 |
| ·目的基因的回收与纯化 | 第47-48页 |
| ·GP5 与M 基因的pIRESneo-GP5-M 表达盒的构建及鉴定 | 第48-50页 |
| ·pPolyⅡ-CAV-2-△E3-GP5-M 的构建 | 第50页 |
| ·重组病毒的包装 | 第50-51页 |
| ·IFA 检测重组腺病毒 CAV2-△E3-GP5-M 的表达 | 第51-52页 |
| ·重组腺病毒 CAV2-△E3-GP5-M 的病毒滴度测定 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-56页 |
| ·PRRSV JL-0605 株 GP5、M 蛋白的扩增与表达盒载体pIRESneo-GP5-M 的构建及鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组病毒的包装及基因组的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·IFA 鉴定重组腺病毒的表达 | 第54-55页 |
| ·重组腺病毒的 TCID_(50) | 第55页 |
| ·重组腺病毒致 MDCK 细胞病变 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 第三章 PRRSV GP5 与 M 蛋白重组腺病毒免疫效果的评价 | 第58-70页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| ·病毒与细胞 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-63页 |
| ·小鼠分组与免疫试验 | 第59-62页 |
| ·重组腺病毒 CAV2-△E3-GP5-M 在猪体的免疫试验 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-68页 |
| ·免疫小鼠的体液免疫应答 | 第63-65页 |
| ·细胞免疫应答（淋巴细胞增殖应答） | 第65-66页 |
| ·重组腺病毒免疫猪体的体液免疫应答 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 5 小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-85页 |
| 附录 | 第85-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 导师及作者简介 | 第90-92页 |
| 中文摘要 | 第92-95页 |
| Abstract | 第95-98页 |
