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基于p-硝基苯丙氨酸插入法构建自体蛋白RANKL的新型疫苗用于抗骨质疏松治疗

缩略语表第6-8页
中文摘要第8-11页
ABSTRACT第11-13页
前言第14-16页
文献回顾第16-26页
实验一 小鼠RANKL基因的克隆第26-38页
    1 实验材料及主要仪器第26-28页
        1.1 实验材料第26-27页
        1.2 主要试剂第27页
        1.3 主要试剂的配制第27-28页
        1.4 主要仪器第28页
    2 方法第28-33页
        2.1 骨髓细胞总RNA提取第28页
        2.2 反转录合成cDNA第28-29页
        2.3 mRANKL胞外段基因的扩增第29-30页
        2.4 pET28a-mRANKL重组表达载体的构建第30-31页
        2.5 pET28a-mRANKL重组表达载体的转化第31-32页
        2.6 菌液PCR鉴定第32页
        2.7 重组表达质粒的酶切鉴定第32页
        2.8 pET28a-pNO2PhemRANKL重组表达载体的构建第32-33页
    3 结果第33-36页
        3.1 骨髓细胞总RNA的提取及小鼠RANKL基因胞外段的PCR扩增第33-34页
        3.2 野生型mRANKL重组表达载体(pET28a-mRANKL)的构建第34页
        3.3 p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL(pET28a-pNO2PhemRANKL)重组表达载体的构建第34-36页
    4 讨论第36-38页
实验二 P-硝基苯丙氨酸突变的MRANKL的原核表达与纯化第38-50页
    1 实验材料及主要仪器第38-40页
        1.1 实验材料第38页
        1.2 主要试剂第38-39页
        1.3 主要试剂的配制第39-40页
        1.4 主要仪器第40页
    2 方法第40-43页
        2.1 p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL重组蛋白的诱导表达第40-41页
        2.2 SDS-PAGE电泳第41页
        2.3 WesternBlot第41页
        2.4 重组蛋白的纯化第41-42页
        2.5 高效液相色谱联合质谱检测第42-43页
    3 结果第43-48页
        3.1 WTmRANKL和p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL的原核表达第43-44页
        3.2 WTmRANKL和p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL的纯化第44-45页
        3.3 纯化蛋白的质谱鉴定第45-48页
    4 讨论第48-50页
实验三 疫苗筛选:小鼠免疫及抗RANKL抗血清滴度和活性检测第50-59页
    1 实验材料及主要仪器第50-51页
        1.1 实验材料第50页
        1.2 主要试剂第50-51页
        1.3 主要仪器第51页
    2 方法第51-54页
        2.1 小鼠免疫第51页
        2.2 抗血清的制备第51-52页
        2.3 间接ELISA法检测抗血清抗体效价第52页
        2.4 WesternBlot检测抗血清活性第52-53页
        2.5 体外破骨细胞原代培养第53页
        2.6 破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色第53-54页
    3 结果第54-58页
        3.1 小鼠免疫及抗mRANKL抗血清滴度检测第54-56页
        3.2 抗血清体外抑制RANKL诱导的破骨细胞形成分析第56-58页
    4 讨论第58-59页
实验四 P-硝基化苯丙氨酸插入法构建的重组疫苗对OVX骨质疏松小鼠的治疗效应分析第59-69页
    1 实验材料及主要仪器第59-60页
        1.1 实验材料第59页
        1.2 主要试剂第59-60页
        1.3 主要仪器第60页
    2 方法第60-62页
        2.1 实验分组第60页
        2.2 小鼠免疫第60-61页
        2.3 小鼠OVX骨质疏松模型的建立第61页
        2.4 间接ELISA法检测抗血清抗体效价第61-62页
        2.5 microCT检测骨小梁微架构第62页
    3 结果第62-67页
        3.1 小鼠骨质疏松模型的建立第62-63页
        3.2 抗mRANKL抗血清滴度检测第63-64页
        3.3 重组疫苗对OVX骨质疏松小鼠的治疗效应第64-66页
        3.4 重组疫苗和双膦酸类药物对OVX骨质疏松小鼠的治疗效应比较第66-67页
    4 讨论第67-69页
小结第69-71页
参考文献第71-76页
个人简历和研究成果第76-78页
致谢第78-79页

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