| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 文献回顾 | 第16-26页 |
| 实验一 小鼠RANKL基因的克隆 | 第26-38页 |
| 1 实验材料及主要仪器 | 第26-28页 |
| 1.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 1.4 主要仪器 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-33页 |
| 2.1 骨髓细胞总RNA提取 | 第28页 |
| 2.2 反转录合成cDNA | 第28-29页 |
| 2.3 mRANKL胞外段基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.4 pET28a-mRANKL重组表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.5 pET28a-mRANKL重组表达载体的转化 | 第31-32页 |
| 2.6 菌液PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.7 重组表达质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.8 pET28a-pNO2PhemRANKL重组表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-36页 |
| 3.1 骨髓细胞总RNA的提取及小鼠RANKL基因胞外段的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3.2 野生型mRANKL重组表达载体(pET28a-mRANKL)的构建 | 第34页 |
| 3.3 p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL(pET28a-pNO2PhemRANKL)重组表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 实验二 P-硝基苯丙氨酸突变的MRANKL的原核表达与纯化 | 第38-50页 |
| 1 实验材料及主要仪器 | 第38-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第39-40页 |
| 1.4 主要仪器 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| 2.1 p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL重组蛋白的诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.2 SDS-PAGE电泳 | 第41页 |
| 2.3 WesternBlot | 第41页 |
| 2.4 重组蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 2.5 高效液相色谱联合质谱检测 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| 3.1 WTmRANKL和p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL的原核表达 | 第43-44页 |
| 3.2 WTmRANKL和p-硝基苯丙氨酸突变的mRANKL的纯化 | 第44-45页 |
| 3.3 纯化蛋白的质谱鉴定 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 实验三 疫苗筛选：小鼠免疫及抗RANKL抗血清滴度和活性检测 | 第50-59页 |
| 1 实验材料及主要仪器 | 第50-51页 |
| 1.1 实验材料 | 第50页 |
| 1.2 主要试剂 | 第50-51页 |
| 1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| 2.1 小鼠免疫 | 第51页 |
| 2.2 抗血清的制备 | 第51-52页 |
| 2.3 间接ELISA法检测抗血清抗体效价 | 第52页 |
| 2.4 WesternBlot检测抗血清活性 | 第52-53页 |
| 2.5 体外破骨细胞原代培养 | 第53页 |
| 2.6 破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-58页 |
| 3.1 小鼠免疫及抗mRANKL抗血清滴度检测 | 第54-56页 |
| 3.2 抗血清体外抑制RANKL诱导的破骨细胞形成分析 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 实验四 P-硝基化苯丙氨酸插入法构建的重组疫苗对OVX骨质疏松小鼠的治疗效应分析 | 第59-69页 |
| 1 实验材料及主要仪器 | 第59-60页 |
| 1.1 实验材料 | 第59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-62页 |
| 2.1 实验分组 | 第60页 |
| 2.2 小鼠免疫 | 第60-61页 |
| 2.3 小鼠OVX骨质疏松模型的建立 | 第61页 |
| 2.4 间接ELISA法检测抗血清抗体效价 | 第61-62页 |
| 2.5 microCT检测骨小梁微架构 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-67页 |
| 3.1 小鼠骨质疏松模型的建立 | 第62-63页 |
| 3.2 抗mRANKL抗血清滴度检测 | 第63-64页 |
| 3.3 重组疫苗对OVX骨质疏松小鼠的治疗效应 | 第64-66页 |
| 3.4 重组疫苗和双膦酸类药物对OVX骨质疏松小鼠的治疗效应比较 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 小结 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 个人简历和研究成果 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
