| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一部分 研究背景和基础 | 第12-35页 |
| 第一章 基因编辑技术 | 第12-22页 |
| 1.1 锌指核酸酶(ZFNs) | 第14-15页 |
| 1.2 转录激活子样效应器核酸酶(TALENs) | 第15-17页 |
| 1.3 成簇规律间隔回文重复(CRISPR) /Cas相关蛋白9(CRISPR/Cas9) | 第17-22页 |
| 1.3.1 CRISPR-Cas系统的历史 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas系统的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3.3 CRISPR-Cas9作为疾病中基因组编辑工具的使用 | 第19-22页 |
| 第二章 细胞因子 | 第22-31页 |
| 2.1 干扰素及干扰素受体 | 第22-27页 |
| 2.1.1 Ⅰ型干扰素及其受体 | 第23-25页 |
| 2.1.2 Ⅱ型干扰素及其受体 | 第25页 |
| 2.1.3 Ⅲ型干扰素及其受体 | 第25-27页 |
| 2.2 白介素 | 第27-31页 |
| 2.2.1 IL-27 | 第27-29页 |
| 2.2.2 IL-32 | 第29-31页 |
| 第三章 干扰素信号通路 | 第31-35页 |
| 第二部分 研究内容 | 第35-81页 |
| 第四章 IFNAR1和IL28R1的干扰表达 | 第35-58页 |
| 4.1 引言 | 第35页 |
| 4.2 实验材料 | 第35-37页 |
| 4.2.1 质粒 | 第35-36页 |
| 4.2.2 试剂 | 第36页 |
| 4.2.3 细胞和病毒 | 第36页 |
| 4.2.4 耗材及仪器设备 | 第36-37页 |
| 4.3 实验方法 | 第37-51页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第37-41页 |
| 4.3.2 质粒提取 | 第41页 |
| 4.3.3 感受态细胞的制备(以Top 10为例) | 第41-42页 |
| 4.3.4 细胞的复苏、培养及冻存(以A549 Cell为例) | 第42-43页 |
| 4.3.5 细胞转染(以24 well为例) | 第43-44页 |
| 4.3.6 RNA的提取及逆转录(以24孔板为例) | 第44-45页 |
| 4.3.7 荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 4.3.8 鸡胚法扩增SeV和H3N2病毒 | 第46-47页 |
| 4.3.9 乙型肝炎病毒E/S抗原测定 | 第47-48页 |
| 4.3.10 蛋白质免疫沉淀(6孔板为例) | 第48-50页 |
| 4.3.11 A549和Huh7干扰素受体敲减细胞系的构建 | 第50-51页 |
| 4.4 实验结果及讨论 | 第51-58页 |
| 4.4.1 IFNAR1和IL28R1在A549细胞中的瞬时干扰表达 | 第51-53页 |
| 4.4.2 IFNAR1和IL28R1瞬时敲减的细胞对病毒的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.3 NC-KD、IFNAR1-KD和IL28R1-KD细胞系的表达及功能 | 第54-58页 |
| 第五章 CRISPR/Cas9技术敲除细胞系构建及验证 | 第58-72页 |
| 5.1 引言 | 第58页 |
| 5.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 5.2.1 质粒 | 第58页 |
| 5.2.2 试剂 | 第58-59页 |
| 5.2.3 细胞和病毒 | 第59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59-66页 |
| 5.3.1 引物设计 | 第59-61页 |
| 5.3.2 用于敲除质粒的构建 | 第61-62页 |
| 5.3.3 细胞计数 | 第62-63页 |
| 5.3.4 敲除细胞系的构建及筛选 | 第63-64页 |
| 5.3.5 VSV-eGFP和VSV病毒的扩增 | 第64页 |
| 5.3.6 噬斑实验 | 第64-65页 |
| 5.3.7 VSV-eGFP对敲除细胞系的感染 | 第65页 |
| 5.3.8 细胞复苏、培养和冻存 | 第65页 |
| 5.3.9 细胞转染 | 第65页 |
| 5.3.10 RNA的提取及逆转录 | 第65页 |
| 5.3.11 蛋白质免疫印迹 | 第65-66页 |
| 5.4 实验结果和讨论 | 第66-72页 |
| 5.4.1 敲除细胞系的构建及筛选过程 | 第66-69页 |
| 5.4.2 Scr.WT、IFNAR1-KO和IL28R1-KO细胞系的功能研究 | 第69-72页 |
| 第六章 IL-27和IL-32在IFNAR1和IL28R1干扰素受体敲除的细胞系的功能研究 | 第72-79页 |
| 6.1 引言 | 第72-73页 |
| 6.2 实验材料 | 第73页 |
| 6.2.1 质粒 | 第73页 |
| 6.2.2 试剂 | 第73页 |
| 6.2.3 细胞和病毒 | 第73页 |
| 6.3 实验方法 | 第73页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第73-79页 |
| 6.4.1 验证IL-27和IL-32的抗病毒功能 | 第73-75页 |
| 6.4.2 干扰素受体敲减的细胞系中验证IL-27和IL-32的抗病毒效应 | 第75-76页 |
| 6.4.3 IL-27、IL-32在干扰素受体敲除细胞系中的抗病毒作用 | 第76-79页 |
| 第七章 研究总结 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-99页 |
| 硕士期间发表和待发表的论文 | 第99-100页 |
| 附录 | 第100-105页 |
| 附录Ⅰ 常用试剂配制 | 第100-104页 |
| 附录Ⅱ 论文中用到的引物序列 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
