| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 技术流程 | 第9-10页 |
| 第一章 材料和方法 | 第10-26页 |
| 1.1 材料 | 第10-11页 |
| 1.1.1 主要实验仪器 | 第10页 |
| 1.1.2 菌株与细胞株 | 第10-11页 |
| 1.1.3 主要实验试剂 | 第11页 |
| 1.2 方法 | 第11-26页 |
| 1.2.1 重组质粒的扩增、提取及鉴定 | 第12-14页 |
| 1.2.1.1 重组质粒的扩增 | 第12页 |
| 1.2.1.2 重组质粒的提取 | 第12-13页 |
| 1.2.1.3 重组质粒的鉴定 | 第13-14页 |
| 1.2.2 Hela细胞的培养 | 第14-15页 |
| 1.2.2.1 Hela细胞的复苏 | 第14页 |
| 1.2.2.2 Hela细胞的培养与传代 | 第14-15页 |
| 1.2.2.3 Hela细胞的冻存 | 第15页 |
| 1.2.3 Hela细胞脂质体转染及转染效率的测定 | 第15-16页 |
| 1.2.3.1 脂质体转染流程 | 第15-16页 |
| 1.2.3.2 转染效率的测定 | 第16页 |
| 1.2.4 G418筛选稳定转染细胞系 | 第16页 |
| 1.2.4.1 确定G418最佳筛选浓度 | 第16页 |
| 1.2.4.2 筛选稳定转染细胞系 | 第16页 |
| 1.2.5 免疫荧光 | 第16-17页 |
| 1.2.6 RT-PCR | 第17-19页 |
| 1.2.6.1 总RNA提取 | 第17-18页 |
| 1.2.6.2 反转录反应 | 第18页 |
| 1.2.6.3 PCR反应 | 第18-19页 |
| 1.2.7 Western Blot | 第19-22页 |
| 1.2.7.1 提取细胞总蛋白 | 第19页 |
| 1.2.7.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第19-20页 |
| 1.2.7.3 电转印 | 第20-21页 |
| 1.2.7.4 封闭 | 第21页 |
| 1.2.7.5 孵育抗体 | 第21页 |
| 1.2.7.6 ECL化学发光 | 第21-22页 |
| 1.2.8 功能检测 | 第22-24页 |
| 1.2.8.1 Hela细胞脂质体转染及稳定转染细胞系的建立 | 第22页 |
| 1.2.8.2 采用RT-PCR和Western-Blot方法检测各组细胞CD59的表达 | 第22页 |
| 1.2.8.3 CD59抗体交联处理细胞 | 第22页 |
| 1.2.8.4 MTT检测细胞增殖 | 第22-23页 |
| 1.2.8.5 TUNEL检测细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 1.2.8.6 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第24页 |
| 1.2.9 裸鼠移植瘤模型的建立 | 第24页 |
| 1.2.10 统计学分析 | 第24-26页 |
| 第二章 结果 | 第26-42页 |
| 2.1 重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| 2.2 Hela细胞的培养 | 第26-27页 |
| 2.3 Hela细胞脂质体转染 | 第27-28页 |
| 2.3.1 CD59干扰质粒转染Hela细胞 | 第27-28页 |
| 2.3.2 CD59高表达质粒与pleGFP质粒共转染Hela细胞 | 第28页 |
| 2.4 稳定转染Hela细胞系的筛选 | 第28-29页 |
| 2.5 免疫荧光 | 第29-30页 |
| 2.6 RT-PCR检测CD59基因的表达 | 第30-31页 |
| 2.7 Western blot检测CD59蛋白的表达 | 第31-33页 |
| 2.8 MTT检测Hela细胞增殖 | 第33-35页 |
| 2.9 TUNEL检测Hela细胞凋亡 | 第35-37页 |
| 2.10 流式细胞术检测Hela细胞凋亡 | 第37-39页 |
| 2.11 裸鼠移植瘤模型的建立 | 第39-42页 |
| 第三章 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 综述 | 第48-66页 |
| 综述的参考文献 | 第62-66页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第66-67页 |
| 附录 试剂的配制 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
